6.5 天小鼠胚胎的解剖

摘要

分离植入后阶段的胚胎可用于研究胚胎发育过程中的基因表达模式及细胞谱系命运决定过程，但早期胚胎的正确解剖操作具有挑战性。本方案描述了一种分离早期原条阶段胚胎（约交配后6.5天[dpc]）的方法。

摘要

分析哺乳动物胚胎发育早期阶段的基因表达模式，可为基因功能、细胞间相互作用以及引导胚胎模式形成的信号机制提供重要线索。然而，胚胎着床后不久从小鼠蜕膜中分离胚胎是一项具有挑战性的操作，且目前尚缺乏对此过程的详细分步记录。

本文演示了如何分离植入后（6.5 天）的小鼠胚胎：首先解剖妊娠小鼠的子宫（以检测到阴道栓的当天定为交配后 0.5 天），随后将胚胎从母体蜕膜中分离出来。同时描述了瑞氏膜的解剖操作以及外胎盘锥的去除方法。

方案

雌性小鼠生殖器官的解剖

1. 使用压缩气体通过 CO₂ 窒息法对怀孕动物实施安乐死。
2. 将动物仰卧置于吸水垫上，并用 70% 乙醇充分浸湿，以降低小鼠毛发污染解剖操作的风险。
3. 捏起皮肤，用普通手术剪在体中线处做一个小的侧向切口。牢固握住切口上下方的皮肤，向头端和尾端方向拉开皮肤，以暴露腹部。
4. 用镊子夹住腹膜并剪开，以暴露腹腔。
5. 在体腔背侧区域找到生殖器官：两个子宫角、输卵管和卵巢。

原条期（6.5 天）解剖

1. 通过夹住输卵管下方的子宫，沿子宫系膜剪下子宫角。将解剖好的子宫置于冰上预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）中。
   
   
   
   图 1
   
   
2. 沿子宫角在每个着床部位之间进行切割，分离各个胚胎。
   
   
   
   图 2
   
   
   
3. 用钟表匠镊子插入周围肌层与包被的蜕膜组织之间，夹住肌性子宫内膜。向后剥离肌层，暴露出蜕膜。
   
   
   
   图 3
   
   
4. 在蜕膜顶端剪除一部分（约蜕膜组织的五分之一），以暴露被包裹胚胎的中腹侧或远端尖部。
   
   
   
   图 4
   
   
5. 可用镊子尖端将胚胎从蜕膜中取出。用镊子在胚胎周围刺穿蜕膜，然后张开镊子撕开蜕膜。
   
   
   
   图 5
   
   
6. 一旦胚胎被取出，Reichert膜以及外胚层锥体（滋养层）可能仍附着其上。可通过精细解剖进一步分离胚胎。
   
   
   图 6
   

讨论

小鼠的着床后阶段发生在受孕后4.5天至出生之间。该解剖方法可基本按照所述方式应用于分离5.5至8.5天受孕后阶段的较早或较晚胚胎。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
微型有齿直头解剖镊	工具	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5130	2 对
微型 #55 型不锈钢解剖镊	工具	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5010	2 对
Dulbecco’s 磷酸盐缓冲液（1×）	试剂	Invitrogen	14190
Fisherbrand 无菌聚苯乙烯培养皿	工具	Fisher Scientific	08-757-12
含 4% 多聚甲醛的 PBS 溶液	试剂
直型尖头解剖剪	工具	Fisher Scientific	08-940
妊娠雌性小鼠	动物
解剖显微镜	显微镜