线虫玻片制备：一种将线虫置于琼脂垫上进行封片的方法

摘要

来源：Teoh, J. S., 等. 在Caenorhabditis elegans中研究细胞结构与细胞器形态的定量方法. J. Vis. Exp. (2019).

在对秀丽隐杆线虫（C. elegans）进行活体成像时，可以使用琼脂糖垫片固定线虫，使其保持静止，同时不会对其造成损伤或使其干燥。  本视频介绍了如何制备一种简单的显微镜载样垫片。

方案

本实验方案摘自 Teoh et al，《在 Caenorhabditis elegans中研究细胞结构与细胞器形态的定量方法》，J. Vis. Exp. (2019)。

成像用玻片的制备

1. 在耐微波的瓶中配制3-4% w/v琼脂糖母液（3-4 g溶于100 mL超纯水中）。
   注意：可在相同浓度下用琼脂替代琼脂糖。
2. 将琼脂糖在微波炉中小心加热融化，注意避免过度沸腾，直至琼脂糖完全溶解（形成澄清溶液）。保持溶液温度在70 °C，以防止凝固。
   注意：琼脂糖母液可多次使用。若琼脂糖已凝固，使用前重新加热即可。
3. 用巴斯德移液管将一滴融化的琼脂糖滴加到显微镜载玻片上。
   注意： 避免在琼脂糖液滴中产生气泡，因为气泡会破坏琼脂垫的完整性。
4. 立即用另一张显微镜载玻片轻轻压下琼脂糖液滴，使琼脂糖在两张载玻片之间均匀压平成垫状。
   注意： 此步骤应去除所有残留气泡。若未能去除，应重新制备载玻片，因为动物容易卡在气泡中。压片时应避免琼脂溢出至边缘。
5. 让琼脂糖自然干燥1分钟。
6. 小心分离两张载玻片，避免损伤琼脂糖，同时将凝固的琼脂垫保留在其中一张载玻片上。
   注意： 琼脂糖垫载玻片应在实验前现配现用，以防干燥。确保琼脂垫厚度均匀一致，且无气泡或裂纹，以免影响成像。
7. 在琼脂糖垫中央加入一小滴（5–10 µL）0.05%盐酸四咪唑（麻醉剂）。
8. 用热灭菌的挑针迅速将约10–15只动物从原培养板转移至麻醉液滴中，避免溶液在转移前干燥。避免转移过多OP50细菌，以免溶液浑浊而干扰成像。
   注意：若在挑取过程中麻醉液干燥，可直接用移液器在动物上方再加一滴0.05%盐酸四咪唑。动物在麻醉液中通常侧卧。
9. 将盖玻片置于琼脂糖垫上方，轻轻放下，以避免气泡产生。切勿对盖玻片施加压力，以免压碎动物。
10. 在载玻片上标记菌株名称。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
琼脂	Merck	1.01614.1000
琼脂糖	Invitrogen	16500-500
盖玻片 #1	Thermo scientifique	MENCS22221GP
盖玻片 #1.5	Zeiss	474030-9000-000	由 SCHOTT 生产
载玻片	Thermo scientifique	MENS41104A/40
巴斯德吸管	Corning	CLS7095D5X-200EA
铂丝	Sigma	267201-2G
盐酸四咪唑	Sigma	L9756-5G