成年果蝇中肠解剖：一种消化道分离方法

摘要

来源：Tauc, H. M. 等人。通过FACS从成年Drosophila中肠分离肠道干细胞以研究衰老过程中的干细胞行为。J. Vis. Exp. (2014)。

在本视频中，我们展示了成年Drosophila肠道的解剖过程，以及中肠的收集方法，适用于单细胞分离和流式细胞分选（FACS），以分离肠道干细胞。

方案

本方案节选自 陶克 等., 分离成年小鼠肠道干细胞 果蝇 通过FACS分离中肠以研究衰老过程中的干细胞行为， 视觉实验杂志. (2014).

注意：如果首次使用本方案通过 FAC 分选来分离 ISCs，则必须设置以下对照，以便正确初始化 FACS 参数：来自野生型（例如 w¹¹¹⁸）Drosophila 中肠的解离细胞，不加 Sytox；来自野生型（例如 w¹¹¹⁸）Drosophila 中肠的解离细胞，加 Sytox（见步骤 3.6）；来自esg-Gal4、UAS-GFP 果蝇品系中肠的解离细胞，不加 Sytox。

1. 肠道解剖用溶液和培养皿的准备

1. 准备4-6个样品管，每个样品管中放入40只来自esg-Gal4, UAS-GFP果蝇品系的雌性果蝇。
2. 用10倍浓度的PBS储存液配制500 ml的1倍浓度PBS（含1.8 mM NaH₂PO₄·H₂O....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
镊子：Dumont，Inox Biologie #5	精细科学工具	11252-20
SefarNitex 03-150um/38（35 µm 尼龙筛网）	Sefar	3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml 圆底聚苯乙烯试管，带细胞过滤器 snap cap	Corning	352235
Polymax 1040	Heidolph	543-42210-00
牛血清白蛋白（BSA）	Sigma	A4503-50G
0.5% 胰蛋白酶-EDTA	Invitrogen	15400-054	不同公司生产的胰蛋白酶活性可能不同 ，因此胰酶消化时间需相应调整。
用于流式细胞术的 SYTOX Blue 死细胞染料	Life Technologies	S34857
RNA later 稳定液	Life Technologies	AM7023	其他溶液（如 Trizol）也可用于后续 RNA 提取
FACSAria II 细胞分选仪	Becton Dickinson		分选前一小时开启仪器