寿命分析：测量 C.伊莱甘斯 寿命

Abstract

资料来源：康威尔、阿.B 等人。 复制集方法：一种高通量方法，定量测量卡诺哈布迪蒂斯埃莱甘斯寿命。J. 维斯 (2018).

此视频描述了一种传统的基于板的方法，测量 C. elegans的寿命。示例协议测量使用 RNAi 治疗的蠕虫的寿命。

Protocol

下列协议是从康威尔等人的摘录，复制集方法：一个高通量的方法，定量测量卡诺哈布迪炎优雅寿命，J.Vis.Exp。 (2018). 

1. 通过添加5-氟-2'-脱氧尿素（FUdR）来防止后代生产

1. 在 20 °C 下种植动物直到 L4 阶段。 检查播种后同步动物是否发展到L4约40小时（步骤2.1.7）。
   注：C. elegans的发育时间会因温度而异，且尚未具有特征的突变动物的生长速度必须经过经验测试。
   1. 在每块 6 厘米的盘子中加入 160μL 的 50 倍 FUdR，并配上 L4 动物。
      注： 在 L4 阶段添加 FUdR 至关重要。为了方便起见，通过将 1 g FUdR 溶解为 10 mL 超纯 H₂O.过滤消毒库存 FUdR，使用 0.2μm 过滤器和 10 cc 注射器，使 FUdR 库存达到 1，000 倍。阿里报价~1 mL库存成无菌1.5 mL管。冻结并存储在-20°C。
2. 检查盘子中男性C.伊莱甘人的存在。删除所有男性。
   注：寿命通常是为母马罗狄蒂而不是男性测量的。交配的赫马赫罗狄蒂比未驯养的动物活得短，即使在FUdR的存在。雄性比母体更小、更薄，很容易被独特的钩尾识别出来。
3. 将盒子放回拉链锁袋中。返回到20°C孵化器。

2. 评分可行性

1. 每天用铂金线或睫毛轻轻触摸动物头部，以得分生存能力。得分动物未能移动作为死亡，并删除他们从板（图1A）。记录每个观察时间点每个情况观察到的死亡人数。
   注： 为了降低评分偏差的风险，实验者必须对实验条件视而不见，同样不得在评分过程中引用以前计分的结果。
2. 检查破裂、死于其他明显发育缺陷的动物，或爬到菜的一侧：取出这些动物，并在每个观察到的时间点记录数量，以便在统计分析中考虑。此外，如果发现雄性，删除它们并记录观察到的数字。
3. 每天重复2.1步，直到没有动物存活。
   注： 如果大肠杆菌的草坪显著减少或真菌开始生长在盘子上，则用适当的RNAi和FUdR将所有剩余的动物转移到新鲜的盘子中。

Results

图1：传统和复制套装方法，用于评分C.elegans寿命（A）。给C. elegans寿命打分的传统方法。随着时间的推移，每个条件的同源动物的几个小同步种群被跟踪。在整个研究过程中，遵循相同的动物种群。可行性通过运动来评估，运动可能受到温柔刺激的刺激。未能移动的动物被打分为死亡，并被移除（愿望显示），直到没有可行的动物留下。（B）。得分C. 电子人寿命的复制集方法。大量年龄同步的同源动物分布在许多相同的复制板上。在每个时间点，都会进行单次复制：添加温和的缓冲解决方案 （M9），从而刺激运动。洪水井后不能自发移动的动物也通过触摸刺激进行评估。实验的评分时间在开始之前确定。每种动物只得分一次，而大种群的寿命来自许多独立的观察。（C）。

Materials