C. elegans 存活率检测：一种短期毒性测试

摘要

来源：Possik, E. 和 Pause, A. 在96孔微孔板中测量 Caenorhabditis elegans 的氧化应激抗性。 J. Vis. Exp. (2015)。

本视频介绍了一种短期生存实验方法，用于检测某种处理的急性毒性，或检测某种遗传品系对有毒条件的耐受性。  示例实验方案展示了一种生存实验，其中线虫被用于检测其抵抗百草枯（PQ）诱导的氧化应激的能力。 

方案

本实验方案节选自 Possik 和 Pause 的 在 96 孔微孔板中测量 Caenorhabditis elegans 氧化应激抗性， J. Vis. Exp. (2015)。

1.  进行氧化应激抗性检测

1. 将40 µl新配制的100 mM PQ溶液加入96孔板的每个孔中。每种条件（处理、突变体等）至少使用12个孔作为重复。 等等。使用铂金丝挑虫针，将5-8只L4期幼虫转移至每个孔中，并记录起始时间和结束时间。
2. 开始另一组实验条件时，记录起始时间和结束时间。在转移线虫后，将培养板置于20 °C条件下孵育，从起始时间开始计时，一小时后对死亡动物进行评分。
3. 使用解剖显微镜，每小时记录一次存活情况。计数前轻轻振荡培养板。若线虫在强光照射后仍不移动，则记为死亡个体。同时记录存活个体数量。
   注意： 通过高倍镜观察线虫的形态、尾部及头部运动，有助于区分死虫与活虫。
4. 每小时重复此步骤，直至大多数蠕虫死亡。

2.  每个时间点存活率的测定

1. 通过将转移至每个孔中的动物总数相加，计算每种条件下动物的总数。忽略在转移过程中受损或死亡的动物。
2. 针对每个时间点，计算每种条件下死亡动物的总数（12个孔中死亡动物数之和）。针对每个时间点，计算死亡率（死亡动物数除以动物总数乘以100）和存活率（100减去死亡率百分比）。
3. 至少独立重复本实验3次。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Discovery v8 立体显微镜（蔡司）	Zeiss
96 孔透明微量滴定板