幼虫运动行为检测：斑马鱼幼虫中化合物神经行为毒性的高通量研究方法

摘要

来源：Zhang B.，等。研究环境污染物对斑马鱼幼体神经行为学的影响。J. Vis. Exp. (2020)

本文通过监测幼鱼的运动行为，描述了斑马鱼对有毒化合物的行为反应。该实验方案进一步探讨了斑马鱼幼体对环境污染物反应的一个示例。

方案

1. 行为测试的准备工作

1. 将800 µL暴露溶液加入至48孔微孔板的每个孔中。
   注意：每组使用16个孔（即对照溶液组、5 µg/L组和50 µg/L组）。
2. 使用1 mL移液器吸头，从玻璃培养皿中吸取含有1条幼虫的200 µL暴露溶液，转移至48孔微孔板的一个孔中。
3. 将4 mL暴露溶液加入至6孔板的每个孔中。
   注意：每组使用一块6孔板。
4. 使用1 mL移液器吸头，将含有2条幼虫的200 µL暴露溶液转移至6孔板的每个孔中。
   注意：每组设有六个重复组。
5. 确保在实验开始前2小时，测试室的温度维持在28 °C。
   注意：行为学测试通常在下午进行。

2. 运动性与路径角度测试

1. 保存实验方案并调暗测试室的灯光。
2. 将幼虫在系统中适应 10 分钟，然后依次点击 "Experiment" "Execute" 按钮，随后选择实验文件保存的文件夹并输入结果名称。
3. 依次点击 "Background" "Start" 按钮以开始测试。
4. 测试结束时，依次点击 "Experiment" "Stop" 按钮以停止实验。
   注意：系统停止后将显示测试数据。数据包括每分钟三个速度等级下的追踪距离，以及八个角度等级下的路径角度数值。在本示例所示的运动行为测试中，计算每个光照时段（10 分钟）内的总移动距离，并比较对照组与处理组之间的差异。
5. 将 48 孔微孔板转移回光照培养箱，用于其他实验。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
48孔微孔板	Corning	3548	胚胎培养
6孔微孔板	Corning	3471	胚胎培养
Zebrabox	Viewpoint	ZebraBox	行为学检测仪器
ZebraLab	Viewpoint	ZebraLab	行为学分析软件
移液器	Eppendorf	3120000267	溶液转移