导管内注射:将注射混合物输送到小鼠乳腺的导管中

1. 导管内注射

1. 在整个手术过程中使用无菌技术。
2. 在两个第四个腹股沟 MG 之间 ~1 cm 的长度处在皮肤上做一个切口（图1）。小心地将皮瓣（带 MG）与壁层腹膜分开，以便看到乳腺导管树。
3. 用 Watchmaker 的镊子小心地握住奶嘴，并使用显微解剖剪刀在不割伤任何附近皮肤的情况下去除外部奶嘴。
4. 将 ~3–5 μL Ad-Cre 注射混合物加载到贴有 33 G 金属针头的 25 μL Hamilton 注射器中。根据混合物中包含的蓝色染料估计注射器中注射混合物的体积。
   注意:注射到 3-4 周龄女性的 MG 中时，使用较小的体积（例如，3 μL），注射到哺乳期女性的 MG 中时，使用较大的体积（例如，10 μL）。
5. 用细弯曲的镊子轻轻握住皮瓣的边缘，将 Ad-Cre 注射混合物缓慢注射到中，同时监测蓝色染料向乳腺导管树的扩散。保持尽可能低的注射速度，以免损伤导管管腔。
   注意:注射的液体（如随附的溴酚蓝染料所示）扩散到整个导管树中，而没有泄漏到基质隔室中，表明导管内注射成功。
6. 轻轻地将针头从奶嘴中抽出，以避免注射的液体泄漏。
7. 检查 MG 的远端（即远离）或注射的周围区域。请注意，肿胀的蓝色染料（即染料扩散到附近的基质中）表明乳房脂肪垫注射，而不是成功的导管内注射。
8. 用伤口夹闭合皮肤上的手术伤口（从 1.2 开始）。

2. 术后护理

1. 将鼠标从麻醉中取出，并将其放在干净笼内的加热垫上进行恢复。
2. 手术后 24 小时再次以 5 mg/kg 皮下施用美洛昔康。
3. 监测动物的一般状况并在切口部位寻找感染迹象 5 天。
4. 手术后 ~7-10 天去除伤口夹。

图 1:将 Ad-Cre 病毒导管内注射到 MG 中的示意图。（A） 两个第四个 MG 之间中线的切口部位。（B） 将带有蓝色染料的 Ad-Cre 导管内注射到第四个 MG 之一中。（C） 通过伤口夹闭合皮肤上的切口