导管内注射：将注射混合物递送至小鼠乳腺导管

摘要

来源：Xiang, D., 等. 通过向小鼠乳腺导管内注射表达Cre的腺病毒建立乳腺癌模型。J. Vis. Exp (2019)。

本视频介绍了一种导管内注射技术，通过该技术将注射混合物递送至小鼠乳腺的导管中。

方案

1. 导管内注射

1. 整个手术过程中均需使用无菌技术。
2. 在两侧第四腹股沟乳腺（MG）之间，于皮肤上做一个长约 ~1 cm 的切口（图1）。小心将皮肤瓣（连同乳腺组织）从壁层腹膜分离，以暴露乳腺导管树。
3. 用钟表匠镊子轻轻夹住乳头，使用显微解剖剪将外部乳头切除，注意不要剪到周围皮肤。
4. 将约 3–5 µL 的 Ad-Cre 注射混合液吸入一支 25 µL Hamilton 注射器中，针头为固定式 33 G 金属接头针。根据混合液中所含的蓝色染料估计注射器内的液体体积。
   注意：向 3–4 周龄雌性小鼠的乳腺注射时应使用较小体积（例如 3 µL），而向哺乳期雌性小鼠的乳腺注射时则使用较大体积（例如 10 µL）。
5. 用精细弯头镊子轻轻夹住皮肤瓣边缘，缓慢将 Ad-Cre 注射混合液注入乳头，同时观察蓝色染料在乳腺导管树中的扩散情况。注射速度应尽可能缓慢，以避免损伤导管腔。
   注意：若注射液（由其中的溴酚蓝染料显示）在整个导管树中均匀扩散，且未渗漏至间质区，则表明导管内注射成功。
6. 缓慢将针头从乳头中抽出，避免注射液泄漏。
7. 检查乳腺远端（即远离乳头的一侧）或注射乳头周围区域。若观察到蓝色染料局部肿胀（即染料扩散至邻近间质），提示注射进入了乳腺脂肪垫，而非成功的导管内注射。
8. 使用伤口夹闭合皮肤上的手术切口（步骤 1.2 所致）。

2. 术后护理

1. 将小鼠从麻醉状态中取出，置于清洁笼盒内的加热垫上进行恢复。
2. 术后24小时再次皮下注射美洛昔康，剂量为5 mg/kg。
3. 连续5天监测动物的一般状况，并观察手术切口部位是否有感染迹象。
4. 术后约7至10天拆除伤口夹。

结果

图1：腺病毒-Cre（Ad-Cre）病毒导入乳腺（MG）的导管内注射示意图。（A）在两侧第四对乳腺之间的中线位置做切口。（B）将含有蓝色染料（以便更清晰观察）的Ad-Cre通过导管内注射注入其中一侧第四对乳腺。（C）使用伤口夹关闭皮肤切口

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
33号针头	Hamilton	7803-05	3型钝头
7 mm 反射夹	Braintree Scientific	RF7 CS
腺病毒 Ad-K5-Cre	爱荷华大学病毒载体中心	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
腺病毒 Ad-K8-Cre	爱荷华大学病毒载体中心	Ad5mK8-nlsCre
溴酚蓝	Sigma-Aldrich	B0126-25G
Hamilton 注射器	Hamilton	7636-01	0.025 mL
显微解剖剪	Pentair	9M	钟表匠镊子
显微解剖镊	Dumont	M5