器官条件培养基：利用收获的器官细胞制备培养基用于转移性癌症研究

摘要

来源：Piaseczny, M. M.，等。器官条件培养基的制备及其在研究器官特异性对乳腺癌转移行为影响中的应用。J. Vis. Exp. (2016)。

本视频介绍了一种从小鼠肝脏制备器官条件培养基的方法。该模型系统可用于鉴定和研究器官来源的可溶性因子及其对癌细胞器官趋向性和转移行为的影响。

方案

1. 肺和脑条件培养基的制备

1. 在无菌组织培养罩内，将含有肺或脑组织的 PBS 管倒置三次，以去除器官中的残留血液，并吸除含血的 PBS。更换新鲜冷 PBS 重复操作，直至溶液清澈、无血液痕迹。
2. 将肺和脑组织分别置于两个 60 mm² 玻璃培养皿中。使用两把无菌手术刀片，通过反复交叉切割将肺或脑组织切碎，直至组织碎片大小约为 1 mm³。
3. 根据计算所得的组织重量差，确定重悬组织碎片所需的培养基体积。
   注意：肺和脑组织通过以 4:1 的培养基与组织比例（体积/重量）进行重悬实现重量归一化。
4. 用适当体积（根据步骤 1.3 确定）的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM）:F12 培养基重悬组织碎片，该培养基需添加 1× 浓度的有丝分裂原补充剂以及青霉素（50 µg/ml）/链霉素（50 µg/ml）。
5. 将重悬后的肺或脑组织碎片加入 6 孔板中的一个孔内。
6. 将组织碎片在 37 °C、5% CO2 条件下孵育 24 小时。孵育结束后，收集每种组织的条件培养基，并在 50 ml 锥形管中加入三倍体积的新鲜培养基进行稀释。
7. 将各器官的稀释后条件培养基在 4 °C 下以 1,000 × g 离心 15 分钟，以去除大块组织碎片。收集上清液，并通过 0.22 µm 注射器滤器过滤。
8. 为消除个体小鼠间的差异，将来自多只小鼠的同种器官条件培养基合并（i.e.，肺与肺合并，脑与脑合并）。分装后于 -80 °C 保存，直至使用。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1× 磷酸盐缓冲液	ThermoFisher Scientific	10010-023	保持无菌
60 mm² 玻璃培养皿	Sigma-Aldrich	CLS7016560	保持无菌
DMEM:F12	Life Technologies	21331-020	使用前在 37 °C 水浴中预热，保持无菌
青霉素-链霉素（10,000 U/mL）	Life Technologies	15140-122	保持无菌
50 mL 圆锥形离心管	Thermo Scientific (Nunc)	339652	保持无菌
0.22 μm 注射器滤器	Sigma-Aldrich	Z359904	保持无菌
6 孔组织培养板	Thermo Scientific (Nunc)	140675	保持无菌
手术刀片	Fisher Scientific	S95937A	保持无菌