尾静脉注射:一种在小鼠模型中施用癌细胞进行转移研究的方法

1. 标记癌细胞的尾静脉注射

注意:步骤 1.2.4 已针对在同基因 BALB/c 小鼠中生长的 4T1 细胞进行了优化。如果使用其他癌细胞系和小鼠品系，则应首先优化注射的细胞数量和测定长度。

1. 在完全生长培养基中的两个 15 cm 培养皿上扩增步骤 2 中产生的 4T1 细胞系，以便在注射当天提供多余的细胞。
2. 如下准备用于尾静脉注射的细胞:
   1. 吸出培养基并用 1x PBS 冲洗细胞板。
   2. 每 15 cm 板用 5 mL 胰蛋白酶胰蛋白酶消化细胞 2-5 分钟（细胞应从孔底部自由冲洗）。将所有细胞转移到锥形管中。用足够的完全生长培养基从组织培养皿中洗涤剩余的细胞以淬灭胰蛋白酶，并将洗涤液添加到同一锥形管中。
   3. 使用自动细胞计数器对细胞进行计数以确定细胞总数。
   将
   4. 细胞以 122 x g 离心 3 分钟，吸出上清液，然后将细胞重悬于所需浓度的 1x PBS 中。在这里，将 2.5 x 10⁴ 个细胞注射到 100 μL PBS 中注入每只小鼠，因此以 2.5 x 10⁵ 个细胞/mL 的速度重悬细胞。将细胞悬液放在冰上直至注射。
      注意:将细胞胰蛋白酶消化和尾静脉注射之间的时间限制在大约 1 小时是很重要的。
通过
3. 侧尾静脉将步骤 1.2.5 中的 4T1 细胞注射到小鼠中，如下所示:
   1. 在动物设施的通风橱中工作，通过倒置试管或使用 1 mL 注射器轻轻但彻底地混合细胞，以确保它们均匀地重悬。在装入注射器之前，请务必确保细胞已重悬。
   2. 装入装有细胞悬液的 1 mL Luer-lock 注射器并排出多余的气泡。将 1/2 英寸、30 号针头放在注射器上，斜面朝上，排出气泡。
   3. 轻轻地将鼠标放入啮齿动物限制器中。
   4. 侧尾脉应该是可见的和扩张的。如果没有，轻轻捏住尾巴的根部，将尾巴浸入温自来水中以扩张静脉><。 注意:也可以通过将鼠标笼放在加热灯下和/或加热垫顶部来实现静脉扩张。
   5. 使用酒精湿巾清洁尾巴。将针头插入尾静脉，斜面朝上，注入 100 μL 细胞悬液。
      注意:如果针头正确插入静脉，它应该很容易略微向前和向后滑动，推动柱塞时不应有阻力。成功的注射还应该导致"潮红"，即注射后几秒钟静脉的蓝色变成白色。
4. 慢慢取下针头并使用无菌纱布，对注射部位施加压力以止血。
5. 将鼠标放回笼子并监控 15 分钟，以确保完全恢复。应每周 3 次检查小鼠是否有疼痛或痛苦的迹象。
6. 使用体内活体动物成像设备监测小鼠的转移形成和生长 3-6 周（细胞系和小鼠品系依赖性）（参见步骤 1.5 和 1.6）。