支气管内给药：一种将实验药物选择性递送至小鼠肺部的技术

摘要

来源：Liao, S. 等. 通过直接支气管内给药提高小鼠肺部选择性药物沉积. J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了一种支气管内给药方法，可将实验性药物选择性地递送至右侧和左侧远端肺组织。在本视频展示的实验方案中，我们将通过支气管内途径向小鼠给予博来霉素，以获得更理想的肺纤维化模型。

方案

所有涉及动物的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 非手术性IB插管与分娩方法

1. IB法选择性插管远端右肺叶支气管
   1. 完成经气管（IT）插管后（用惯用手将延长的导管插入气管） 通过 口腔），将塑料板顺时针旋转 +30°（图1A).
   2. 握住导管的连接端，将其自然地平行于小鼠体中线推进，根据体重对应的深度进行延伸，具体操作如文中所述。 表1.
      注意： 应记录这些深度处的阻力情况。此时，小鼠将出现轻度呼吸急促，如代表性结果中所述。对于有经验的操作者而言，约90%的尝试可成功插管至右肺（并观察到呼吸急促）。
   3. 加入20 µL的0.3%伊文思蓝染料（Evans blue dye，EBD，参见 材料表使用凝胶上样枪头。
   4. 使用玻璃滴管排出1–2份（每份0.1 mL）空气。
      注意： 这可确保清除导管内残留的EBD溶液（或实验试剂）。
   5. 撤出导管，然后保持小鼠体位30秒。
   6. 将动物置于加热毯上直至其恢复意识。通常在2分钟内可完全恢复。
2. IB方法选择性插管远端左肺节段
   1. 完成气管内插管后（用优势手将延长导管插入气管） 通过 口腔），旋转塑料板 -74°（图1B).
   2. 握住导管的连接头，施加轻柔压力将导管推进至左侧主支气管，同时适度向下（90°）并向书挡方向施压。当达到记录的深度时 表1操作者应注意阻力，因为导管正在进入左肺的下部支气管。若出现呼吸急促，应将导管撤回至20–25 mm位置，并重新尝试。
   3. 在插管左下肺段后，需调整体位，以借助重力辅助给药。将塑料板旋转 -30°（图1B).
   4. 使用加样枪头加入40 µL的0.3%伊文思蓝溶液。
      注意： 由于左肺仅有一个肺叶，因此可以输送更大体积的药剂。
   5. 使用玻璃滴管分配1–2份空气（每份0.1–0.3 mL）。
      注意： 这可确保清除导管内残留的伊文思蓝染料（或实验试剂）。
   6. 撤出导管，然后保持小鼠体位30秒。
   7. 将动物置于加热毯上，直至其恢复意识。通常在2分钟内可完全恢复。

结果

图1： 选择性右/左肺叶插管与给药方法。 （A）为靶向右肺，将塑料板旋转+30°，以更便于选择性进入右主支气管。根据表1建议的距离推进导管，实现对右侧肺叶的选择性插管。注入20 µL的0.3%伊文思蓝染料（EBD）。约90%的实验中成功插管至后叶，其余10%的实验中导管进入下叶。（B）为靶向左肺，首先将塑料板旋转-74°以进入左主支气管。成功插管后，将旋转角度减小至-30°，以利用重力辅助试剂输送。为验证对左侧...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
22 G 带护套静脉导管 	 BD	381423
伊文思蓝染料 	西格玛奥德里奇	 E2129
LED-30W 光纤双蛇形管灯显微镜照明器 	AmScope	 LED-30W
Precisionglide 针头，18G × 1"  	 BD	305195	斜面针尖，长度 12 mm