miRNA 提取:一种从血浆样品中提取 miRNA 的方法

摘要

来源:Mensah， M. et al.， 基于 MicroRNA 的液体活检:血浆 miRNA 特征分类器 （MSC） 用于肺癌筛查的经验。J. Vis. Exp. （2017 年）。

MicroRNA （miRNA） 是调节基因表达的组织特异性小非编码 RNA，可能是肺癌早期检测的理想候选者。在特色方案中，我们将从患者血液样本中分离 microRNA，用于早期肺癌筛查。

方案

1. 血浆样本采集

1. 在喷涂 K₂EDTA 的 Vacutainer 管中收集 10 mL 全血样品，并在室温下储存><。 注意:为了尽量减少溶血，请在 2 小时内分离血浆。请勿将全血储存在低温（即 4 °C）下，以避免热休克和细胞裂解，从而导致非特异性 miRNA 释放。
2. 在 1 小时内，通过第一次离心步骤在 1,258 x g 和 4 °C 下分离血浆 10 分钟。
3. 将血浆上清液转移到 15 mL 试管中，小心避免接触淋巴细胞环。
4. 将血浆在 1,258 x g 和 4 °C 下第二次离心 10 分钟。
5. 将 1 mL 血浆分装到 1.5 mL 冻存管中，避免在试管底部收集血浆组分。
6. 将所有等分试样储存在 -80 °C，除了一个用于评估溶血。分子分析应在 5 周内进行。

2. 血浆总 RNA 提取

1. 制备 1-硫代甘油/均质 （OMG） 溶液，每 mL 均质溶液含 20 μL 1-硫代甘油。由于 1-硫代甘油是粘性的，因此请小心移液以确保准确测量。使用前将 OMG 溶液在冰上或 2-10 °C 下冷却。
   注意:工作溶液在 2-10 °C 下可稳定保存 1 个月。
2. 向小瓶中加入 2....

材料