本视频展示了一种在受控环境下研究好氧真菌降解木质纤维素植物组织的方法。琼脂块微环境系统能够控制营养来源和湿度，这是其主要优势，但该方法常出现结果不一致的问题。本文针对关键的实验陷阱进行探讨，以获得可重复、变异度低的实验结果。
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摘要
摘要
研究真菌降解木质纤维素植物组织的两种主要方法最初是为木材防腐剂测试而开发的（土块法；琼脂块法）。普遍认为，土块法微宇宙系统能产生更高的降解速率，水分问题更少，不同研究间的变异性更低，且对防腐剂毒性的耐受阈值更高。因此，土块法是更常用的技术，并已被美国材料与试验协会（ASTM）标准化（方法 D 1413-07）。然而，土块法设计存在缺点，例如使用具有地域差异的土壤来源，以及难以控制降解组织外部（外源性）的营养条件。这些缺点在将该方法应用于其他日益热门的研究目标时日益凸显。这些现代研究目标包括：为生物能源研究降解木质纤维素材料、测试共代谢有毒物质的生物修复、评估氧化机制，以及追踪沿菌丝网络转移的元素。土块法在这些应用中无法提供足够的控制能力，因此有必要采用一种改进的琼脂块方法。
本研究采用褐腐木材降解真菌Serpula lacrymans，在低钙琼脂块微宇宙系统中降解木材，使用深型培养皿和低钙琼脂。我们通过时间序列实验检测外源石膏对木材降解的影响，以展示该方法的实用性及预期的变异性。取自同一块木材纵向切割条的样品经调湿、称重、高压灭菌后，无菌地放置于塑料网格上方。真菌接种于每个木块的各个表面，外源石膏则添加在界面处。收获过程保持无菌操作，直至最终的破坏性取样。这些微宇宙系统的设计旨在避免木块与琼脂或培养皿壁接触。在倒平板和培养过程中尽量减少冷凝水的产生。此外，接种物、石膏与木材之间的间距尽可能小，但不发生直接接触。琼脂块实验设计中这些看似技术性较低的环节，恰恰是实验失败最常见的原因，也是不同研究之间变异性的主要来源。因此，视频发表在此类研究中具有重要价值，本文展示了低变异性和高质量的实验结果。
方案
本方案适用于木质和非木质基质，如文中所述，也适用于烘箱干燥或空气干燥的材料。但在设置前，请先通读整个方案。文中提出了若干可能影响您研究的要点，这些要点（已加下划线）需要提前规划。此外，请注意目前有两种已发表的琼脂块方法偶尔被使用：一种是英国标准838（British Standard 838），另一种是遵循Bravery（1978年）提交给国际木材保护研究组织（IRG-WP）的论文所描述的方法。我们的方法与838标准相似，主要在微环境设计和琼脂培养基控制方面进行了修改。然而，由于历史上木材样品块的水分控制存在问题，可能导致缺氧和实验结果变异，这两种方法通常都被避免使用。关于这些测试方法的综述，包括对琼脂块设计（含838标准）的讨论，可参见Nicholas（1973年）的文献。
1) 准备微宇宙系统
这些试验所用的微型培养皿比普通培养皿高1 cm（更深），以增加木块上方的空间。培养皿中加入适量且精确量的琼脂，以控制营养物的绝对含量及其浓度，并确保木块与皿盖之间保持足够距离（>3 mm）。在石膏测试中使用的琼脂为低钙型A类琼脂；然而，本研究展示的结果采用布莱克斯利培养基（Blakeslee's medium），这是美国典型培养物保藏中心（ATCC）推荐用于维持测试菌株Serpula lacrymans（Wulfen: Fries）Schroeter菌株EMPA 65（ATCC 32750）的培养基。
这种设计使植物组织远离琼脂接触，并避免与培养皿盖和皿壁接触。木质纤维素基质的润湿程度不一是琼脂块试验中变异性的主要来源。润湿以提高含水量会导致缺氧，从而抑制甚至停止好氧生物降解过程。这对于研究负责木材分解的褐腐和白腐真菌的氧化机制的研究者而言也带来了问题。如果培养皿盖上形成自由水滴并润湿基质，则会产生冷凝水问题。同样，当木材和其他组织与琼脂接触时，会迅速通过毛细作用吸水，导致含水量超过80%（以干重为基础），进而中断好氧降解过程。因此，必须将组织与这些水源隔开，使丝状真菌能够寻找、连接并调控基质内的水分。
- 制备足量的琼脂培养基，以使每个培养皿中加入 20 ml 琼脂即可填满所需数量的培养皿。我们每种处理设置五个重复（n=5），该数量通过基于以往结果的统计功效分析确定。
- 对于无钙和无铁的 A 型琼脂，将 15 g 琼脂加入一个 500 ml 容量瓶中，瓶内含有约 400 ml 去离子水，并添加 1.0 g NH4NO3、1.0 g 一元磷酸二氢钾（KH2PO4）、0.25 g MgSO4·7H2O 和 1.0 g 葡萄糖。向该混合物中使用储备液添加微量元素：分别加入 H3BO4（0.057 g / 100 ml）和 ZnSO4（0.031 g / 100 ml）各 50 μl；再分别加入 MnCl2（0.036 g / 100 ml）、CuSO4（0.039 g / 100 ml）和 (NH4)6Mo7O24（0.018 g / 100 ml）各 50 μl。添加完营养成分后，将容量瓶加水定容至 500 ml 刻度线。
- 在此情况下，典型的钙添加量为 0.05 g CaCl2·2H2O / 500 ml。在本实验中，我们以琼脂中的钙作为处理因素，终浓度为 5 mM。为平衡离子强度增加和氯离子的引入，我们在其他微宇宙系统中添加 5 mM NaCl。类似地，本演示使用无铁培养基；但在需要添加铁的情况下，可将 0.112 g FeSO4 溶于 2 ml 去离子水中，涡旋混匀后立即加入 50 μl 此新鲜溶液（非储备液）。在任何需控制营养添加的培养基中，灭菌前检测 pH 值是明智的做法。酸性或碱性添加物（例如 FeCl3）会影响琼脂的凝固。
- 将培养基转移至烧瓶中，在 121°C 和 16 psi 条件下高压灭菌 20 分钟。我们不使体积超过 500 ml（每 1000 ml 烧瓶），以避免琼脂在完全转移至试验培养皿前即发生凝固。
（注意：当使用替代性培养基时，尤其是添加基础盐类的最低营养琼脂，应首先验证待测真菌能否在其上生长。高离子强度可能抑制生长，甚至导致测试菌株死亡。） - 待烧瓶冷却后，在生物安全柜中使用便携式移液器和 10 ml 无菌聚苯乙烯移液管无菌转移琼脂。此处应让培养基冷却至可触碰温度，以尽量减少冷凝水的形成。同时，在倾注时将培养皿堆叠放置，以减少盖子上的游离水分。虽然在常规培养中冷凝水仅为不便，但在此实验中若形成水滴并润湿木材，则会成为严重问题。当含水率（MC）超过 80%（以干重为基础）时，组织内将产生厌氧环境，限制好氧真菌的降解作用，并增加实验变异性。含水率按以下公式计算：
MC* = [(鲜重 - 干重) / 干重] × 100
（*MC 可超过 100%——这看似是异常的计算方式，但为标准方法）- 替代性微宇宙系统：若测试的植物组织需预先研磨并过筛（例如玉米秸秆和叶片混合物），我们采用两种培养皿方案。可使用具有 2 或 4 个区室的分隔培养皿，并可在某些区室中不加琼脂而直接加入粉末。也可将已凝固的琼脂切割并移除部分以留出粉末空间，但若需控制养分供应，则必须注意保持剩余琼脂体积相等。
- 将充分裁剪的塑料网格无菌添加至培养皿表面，所用网格需经彻底清洗并高压灭菌。我们使用一种产品 Gutter Guard（35 × 50 mm，厚 2 mm）作为网格材料，并已通过扫描电子显微镜证实经肥皂水清洗后表面洁净，且无真菌穿透现象。我们曾尝试使用玻璃纤维滤膜或将木块直接置于发育良好的菌丝上，但均因毛细作用问题而效果不佳。虽然仍可发生降解，但变异系数（CV）较高，导致处理间的统计比较效力较弱。我们此前使用过玻璃棒，但木块在受到扰动时易从棒上滑落，导致其与琼脂直接接触。一种较好的替代方案是裁剪成完整圆片以适配培养皿，仅切去一侧边缘以便接种。通常应根据自身实验设置裁剪网格，但需确保其完全平整地置于培养皿内。
2) 准备“块状”基底
这些方案最初是为实木材料开发的，但也可适用于其他植物组织。在丝状真菌降解木材的研究中，质量损失是衡量降解程度的标准指标。因此，本方法通过测定降解前后样品的烘干重量来计算质量损失。然而，在以植物组织化学特性为重点的生物能源研究中，许多研究者认为风干组织更为合适。本文提供了制备琼脂块培养物时使用烘干起始材料的方案，同时也给出了采用风干处理以及使用粉末而非固体基质的替代方案。
- 本演示中使用南方黄松（SYP）。SYP 是一种商业上可获得的木材，代表了美国住宅建筑中使用的绝大多数木材。它可能是四种 Pinus 物种中的任意一种。使用未经处理的木材，并从沿纹理方向的一次纵向切割中切出无节的木块（19 × 19 mm），以最大限度地减少木材中的化学成分差异。将此长度的木材切割成 19 mm3 的小方块。我们采用这种尺寸进行土壤块试验，并在台式锯上一次性切割多个木块。
- 用于琼脂块微宇宙实验的 19 mm3 木块需进一步沿纹理方向用凿子和锤子劈成两半，而非使用锯子。这样可形成一个粗糙的底面朝下放置于塑料网筛上，以及一个光滑的顶面用于标记。用铅笔标记木块。如果无法直接标记底物，请务必设计一套系统以跟踪样品。根据实验处理需求切割足够数量的木块（我们通常每个处理设置 n=5），同时准备未接种的对照组，用于污染监测和作为平行条件下的基线数据样本。
- 对于烘干样品，将样本置于 100°C 的对流烘箱中加热 48 小时。若需风干材料，则将样本置于恒定温湿度的环境或房间中进行平衡处理。我们通常采用 65% 相对湿度和 20°C 条件，一般需要 10–14 天的平衡时间，具体取决于材料性质。
- 预先称量样本以确定其初始绝干重量或鲜重。对于从烘箱中取出的样本，直接转移至干燥器中冷却后称重即可。
- 替代风干方法：对于风干材料，取五个样本（n=5；为牺牲样本，不用于后续微宇宙实验），先称取鲜重，然后按上述方法烘干并再次称重。按以下方式计算每个样本的含水率校正因子：
含水率校正因子 = 绝干重量 / 鲜重
示例：2.46 g（干重）/ 2.68 g（鲜重）= 0.918；因此，一个 3.0 g 的鲜样木块相当于 2.75 g 的绝干重量
对五个样本的结果取平均值，得到平均校正因子。随后称量所有风干木块，将每个重量乘以该平均含水率校正因子，以确定其初始绝干重量。
- 替代风干方法：对于风干材料，取五个样本（n=5；为牺牲样本，不用于后续微宇宙实验），先称取鲜重，然后按上述方法烘干并再次称重。按以下方式计算每个样本的含水率校正因子：
- 将已标记的样本在 121°C 和 16 psi 条件下高压灭菌 1 小时，较大样本可适当延长灭菌时间。灭菌时用铝箔紧密包裹，以尽量减少吸湿。
- 替代灭菌方法：如有条件，可使用γ射线辐照进行灭菌。我们此前曾测试过云杉和山毛榉木材在不同温度下半纤维素损失情况，结果未发现明显影响，且无强度下降或颜色变化。然而，不同底物之间可能存在差异，具体取决于您的偏好或需求，而γ射线辐照已被证实是一种有效的替代灭菌方法。
- 本实验旨在评估固体石膏（纯石膏与含 1% FeSO4 的石膏）对南方黄松（SYP）样品降解作用的影响。这些石膏片被制成具有精确表面积和体积的圆盘状，以便在控制浓度的同时也控制其可利用性。这些圆盘需单独进行高压灭菌，并在接种步骤中加入。每个木块需对应一个圆盘，我们在每个培养皿中放置两个木块，以便进行两次取样收获。
3) 接种与标记
接种琼脂块微环境比接种土壤块培养瓶更耗时。对我们而言，每次接种大约需要3分钟。对于含有琼脂的培养皿，此时需加入筛网、木材、任何外源性营养物质（此处为石膏颗粒）以及真菌。由于培养皿盖开启时间较长且操作次数较多，污染风险随之增加。此步骤中还常出现若干关键性错误，结合视频与文字说明可更有效地避免这些问题。请观看视频。
- 在无菌生物安全柜中，准备好空的琼脂培养皿、真菌接种物来源平板（我们使用培养2周的菌种）、塑料网、植物基质（木材）、外源材料、记号笔、封口膜条以及转移工具。我们使用70%乙醇进行火焰灭菌，接种物转移使用接种针，而处理木块和塑料网则使用镊子。应使用刀片切割封口膜，避免边缘出现缺口；封口膜上的缺口会导致密封时破裂，从而扰动样品并需要重新操作。
- 在添加以下各项之前，先对转移工具或镊子进行火焰灭菌（按以下顺序操作）：
- 塑料网。
- 木材基质。在本实验中，我们将沿塑料网长度方向放置两块木块，这两块木块均来自同一初始木块的对半切割，以便配对早期和晚期收获的数据。木块并排放置，其端面（木材横截面）朝向真菌接种源的位置。
- 外源材料。本实验旨在测试石膏对丝状真菌降解作用的影响。因此，我们希望真菌在接触木材前先接触到这些石膏圆片，故将一个石膏圆片置于每个接种点与木块之间的塑料网上方。这意味着每个微生态系统中添加两个石膏圆片。注意不要让圆片与木材直接接触，但应保持较近距离。
- 真菌接种物。我们使用直径为7 mm的#4打孔器，从在20 ml琼脂培养基上生长2周的菌落中制备菌塞，以控制接种量。对于未接种的对照组，建议使用无菌平板上的空白琼脂塞。通常将这些菌塞直接放置在琼脂表面，而非塑料网上。避免接种物与外源基质或木材直接接触，但仍需将其放置在邻近位置。每块木块对应一个接种菌塞。
注意：建议在开始操作前先在琼脂培养皿中试装一次，以确保至少留有3 mm的顶部空间，木块与皿盖侧壁之间至少保持3 mm的距离，并确认塑料网的尺寸能够轻松容纳所有基质。
- 使用封口膜密封培养皿，操作时保持酒精灯火焰燃烧，并准备好镊子。手持培养皿保持水平，用封口膜以平滑连续的动作缠绕密封。若封口膜断裂或内部组件发生移位，需移除封口膜，重新打开并重新组装内容物后再次密封。
- 使用耐酒精标记笔在培养皿盖上标注编号，将木块编号直接标记在对应基质的上方位置。我们还会在石膏圆片的位置画上圆圈作为标识。随着木材降解，基质表面的标记可能逐渐无法辨认。因此，准确记录每个培养皿的位置至关重要。此外，切勿低估真菌降解或定殖多种其他材料（包括金属）的能力。
- 若塑料网上的组装结构较为脆弱，请将培养皿**小心转移**至培养箱。我们曾有一次因培养皿盒碰撞门框而导致所有样品移位，不得不重新组装。请务必谨慎操作，提前规划转移路线。虽然这只是单次操作，但仍需格外小心。
4) 培养与收获
可根据您的真菌需求进行培养皿的孵育，但应尽可能置于生物培养箱中，以避免因温度波动而产生冷凝水。时间序列取样需在无菌条件下进行，最后一次取样除外。若在真菌于底物上显著生长后进行这些中间取样，则操作培养皿会更加方便，因为菌丝会交联底物。
- 在本实验中，我们将培养皿置于 20°C 黑暗条件下进行培养。在第 5 周收获时，取出全部处理组样品，用 70% 乙醇喷洒每个培养皿的底部和顶部，并在生物安全柜中使用火焰灭菌的镊子取出内部材料。
- 在销毁琼脂平板前拍摄照片，重点关注任何形态特征或黑色素沉积情况。
- 根据实验需求取出待处理的木块。戴上腈类手套后，用手指轻轻滚动以去除多余的菌丝，但需注意不要丢失任何腐朽材料。我们通常将木块置于铝制称量盘中，在烘箱中干燥以测定质量损失，并利用对照组的新鲜重量和干燥重量监测是否存在过度吸水现象。我们还会标记并记录任何明显积水的深棕色木块，尽管采用本方法后此类情况应极少发生。质量损失数据有助于评估腐朽进程，若后续需以单位质量为基础计算元素浓度，则该数据尤为重要。此外需注意，百分比数据在统计分析前必须进行标准化处理。我们按以下公式计算：
% 质量损失 = [(初始重量 – 最终重量) / 初始重量] × 100- 替代性空气干燥法：若需采用空气干燥，且后续还需对材料进行生物学处理，则应使用第 2.3 节中的调节方案重新平衡水分。若必须测定质量损失，则需测定含水量。一种解决方案是将木块（或粉末）分为较大和较小两部分，分别称重，但仅将较小部分进行烘箱干燥。按上述方法计算含水量换算系数，然后将其应用于小份与大份的总新鲜重量（即整个木块的总鲜重）。特别是在真菌预处理材料用于糖化或其他工艺之前，质量损失数据将有助于后续的质量平衡计算，并计入真菌消耗的碳水化合物。
- 将培养物放入可高压灭菌的袋子中销毁，但保留塑料支撑网及其他可回收部件，以便在未来的实验中重复使用。
5) 结果解读
在琼脂块设计中，木质纤维素组织通常降解较慢，但在该阶段，即使降解程度中等，变异程度也应相对较低。对照组织中的水分含量应为中等（20-50%），而非过高。
- 未暴露于真菌的木材含水率（以干重为基础）通常处于中等水平，在本演示中约为40%。该数值高于松木的纤维饱和点（FSP，通常约为24%），表明木材中存在超出木质纤维素次生细胞壁结合水之外的自由水。这也意味着可能发生一定程度的毛细吸水现象。即使相对湿度达到100%，木材含水率也不应超过FSP。具体实验结果可能因基质和筛网的选择不同而有所差异。关键在于将木材含水率（以干重为基础）控制在85%左右以下。
- 在这些琼脂块微宇宙系统中，大多数真菌经过16周降解后，木材的质量损失百分比通常约为30%。对于某些特定真菌，如本例中的Serpula lacrymans，在此期间可达到完全降解。 >60% 质量损失。S. lacrymans 是一种褐腐真菌，几乎不降解木质素，因此本试验中 62% 的质量损失表明腐朽已接近或达到完成阶段。白腐真菌可降解木质素，其质量损失程度取决于真菌种类及底物类型。
- 注意记录菌丝形态。在本实验中，菌丝形态本身并未直接显示任一处理的成功或失败，但黑色素化颜色具有重要意义。这使我们能够将铁作为石膏中杂质的作用与Low等人的早期研究联系起来 等 （2000），其中对天然材料进行了测试，并观察到了这种“锈”色变化。Low中曾讨论过钙和铁的作用 等 (2000)，此处我们观察到铁存在时降解增强，而非钙，且可见同样呈锈色的菌丝。
- 如果要测定降解木材中任何物质的浓度，最好对质量损失进行归一化处理。例如，若钙在降解50%的木材中既无输入也无输出，以其质量为基础计算的浓度将表现为从初始时间到最终采样时增加一倍。这是因为当前1 g粉末所代表的木材体积是初始时的两倍，真菌已消耗了50%的基质，导致密度降低。为补偿质量损失，应对任一给定浓度（例如 mmol/g）按如下方式归一化：
归一化浓度 = mmol/g × [1 - (% 质量损失 / 100)]
示例：降解20%的木材中钙含量为10 mmol/g，而初始时为7 mmol/g。
问题：衰变过程中钙含量是否增加？
10 mmol/g 相比之前表观增加了 3 mmol/g，即增加了 43%，但由于降解木材的粉末密度较低，一克粉末所占体积更大。因此，需进行归一化处理，以比较相同木材体积下的初始与最终钙含量。
10 × [1 × (20% / 100)] = 8 mmol/g 归一化
答案：是的，Ca 确实增加了，但增幅为 14%，而非 43%。
（数据也可按木材体积表示，单位为 mmol/cm3，通过乘以密度。
图 1. 琼脂块微环境系统，如本演示中所示，接种前的设置状态。
图 2. Serpula lacrymans 定植于塑料网上的松木块，使木块高于琼脂接触面。该菌丝体代表了木材与外源性营养/元素来源之间的重要连接，通过琼脂或固体材料控制这些外源物质是琼脂块设计相较于土壤块设计的关键优势。
图3. 在含松木的琼脂块微宇宙系统中，经5周和15周培养后，Serpula lacrymans 引起木材腐朽程度的平均重量损失百分比。处理方式包括：无添加（无钙）、在琼脂中添加5 mM CaCl2（CaCl2）、>99% 纯度的石膏（CaSO4）或含1%铁改性的石膏。采用Tukey检验进行保护性ANOVA均值比较，显著性水平α=0.05。每次采收时，标注相同字母的柱间差异不显著。误差线表示标准差。数据来源：Schilling（2010）。
图 4. 第15周时同一种褐腐真菌Serpula lacrymans引起腐朽的全部五个重复样本的俯视图（A），以及取出后经烘箱干燥的试块（B）。注意无钙处理中缺乏黑色素化现象，纯钙处理中的黄化现象，以及添加铁处理中的锈色外观。处理方式的标注同图3，其中（B）中的对照为未接种的试块，用于比较。
图 5. 来自另一次试验的俯视图，该试验使用了更高铁浓度的培养基——Blakeslee 麦芽琼脂。与图 4 相比，可观察到黑色素化现象消失。对移除并称重的试块进行分析，结果显示处理方式对重量损失无影响。本图用于展示这些试块试验中外源性成分的影响。此类效应在土壤试块瓶设计中无法检测，因为在该体系中外源性输入难以控制。
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讨论
利用我们的琼脂块实验装置（图1），Serpula lacrymans 能够直接与石膏表面接触生长，并侵入木材块中（图2），导致对照组褐腐松木块的重量损失超过60%（图3）。该结果轻松满足ASTM标准中>50%的腐朽要求，且在第16周时腐朽程度的平均变异系数（CV）为0.055。此数据已发表于Schilling7的研究中。需要注意的是，其他真菌在琼脂块中的培养时间通常需长于土壤块中的培养时间。作为参考，我们在以往的多个实验中已成功应用类似设计，研究了多种其他真菌种类，并常结合扫描电子显微镜-能谱分析（SEM-EDS）和电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）来验证真菌与外源基质的连接性，以及钙和其他元素向木材内部的迁移8,9。
除了变异性较低之外，我们的琼脂块设计还揭示了另外两个结果。首先，存在处理效应（图3），即无论以CaCl2形式还是纯石膏形式向琼脂中添加钙，均会抑制该真菌的降解作用。这一结果具有重要意义，因为其他研究者曾基于对砂浆和灰泥等实际材料的研究，提出钙可...
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 培养皿 | Nalge Nunc international | 4014 | 25 × 150 mm |
| 琼脂，A型 | Sigma-Aldrich | A4550 | |
| 硝酸铵，NH4NO3 | Millinckrodt | 3436-12 | |
| 磷酸二氢钾，KH2PO4 | JT Baker | 3246-01 | |
| 七水合硫酸镁，MgSO4•7H2O | Sigma-Aldrich | 230391 | |
| D-(+)-葡萄糖 | Sigma-Aldrich | G8270 | 右旋糖 |
| 硼酸，H3BO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 2549-04 | |
| 七水合硫酸锌，ZnSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 8880-12 | |
| 四水合氯化锰，MnCl2•4H2O | JT Baker | 2540-04 | |
| 五水合硫酸铜(II)，CuSO4•5H2O | Sigma-Aldrich | 209198 | |
| 四水合钼酸铵，(NH4)6Mo7O24•4H2O | Sigma-Aldrich | 431346 | |
| 二水合氯化钙，CaCl2•2H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 4160-12 | |
| 氯化钠，NaCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 7581-12 | |
| 七水合硫酸亚铁，FeSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 5056-12 | |
| 移液辅助器 | Drummond Scientific | 4-000-110 | 无线 用乙醇擦拭表面 |
| 10 ml 无菌聚苯乙烯移液管 | BD Biosciences | 357551 | |
| 滤网盖 | Thermwell Products Co. | VX620 | 预先用肥皂清洗 五金店 |
| 半水合硫酸钙，CaSO4•0.5H2O | Acros Organics | 385355000 | |
| 4号软木钻孔器 | Boekel Scientific | 1601 | |
| Parafilm "M" | Pechiney Plastic Packaging | PM-996 |
参考文献
- ASTM D1413-07. Standard test method for testing wood preservatives by laboratory soil-block cultures. . Annual Book of ASTM Standards. , 185-192 (2007).
- Bravery, A. F. A miniaturized wood block for the rapid evaluation of wood preservative fungicides. , International Research Group on Wood Protection (IRG/WP 2113). (1978).
- Low, G. A., Young, M. E., Martin, P., Palfreyman, J. W. Assessing the relationship between the dry rot fungus Serpula lacrymans and selected forms of masonry. Int. Biodeterior. Biodegrad. 46, 141-150 (2000).
- Nicolas, D. Volume I (One/1) - Degradation and Protection of Wood (Syracuse Wood Science Series #5). Wood Deterioration and Its Prevention by Preservative Treatments. , Syracuse University Press. (1973).
- Schilling, J. S. Effects of calcium-based materials and iron impurities on wood degradation by the brown rot fungus Serpula lacrymans. Holzforschung. 64, 93-99 (2010).
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