小鼠模型中通过立体定位大池途径进行治疗递送

摘要

来源：Joshi, K., 等．通过小鼠大池途径立体定位手术微量注射尾侧脑干和上颈段脊髓的方法．视频实验杂志（2022）

本视频展示了通过小脑延髓池立体定位途径向脑干和上段脊髓进行靶向递送的方法。通过进入充满脑脊液的小脑延髓池，该方法可实现对使用常规立体定位技术难以到达区域的精确注射。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 打开脑池膜

1. 使用倾斜的Dumont镊子夹住从枕骨延伸至寰椎的硬脑膜。在靠近枕骨处夹住硬脑膜，并使用弹簧剪在硬脑膜上开一个小口（约0.5至1.5 mm）。
   注意：在此较靠前的位置，脑干与上方硬脑膜之间的间隙最宽，便于安全操作硬脑膜。
2. 使用弹簧剪抬起硬脑膜并进一步扩大开口。窗口的大小取决于靶向区域。
   注意：进行多次纵向注射或双侧注射时需要较大的窗口；而进行单侧或中线单次注射时，较小的窗口即可满足需求。
3. 打开硬脑膜后，用无菌棉签吸除多余的脑脊液。

2. 标志点与零点的确定

1. 通过打开的硬脑膜观察脑干背侧表面的详细解剖标志。室管膜孔（obex）是中央管通入第四脑室的部位，作为标准的前后和内外侧零点。

靶点注射

1. 使用立体定位臂将移液器或注射器降至目标位置，并按照标准的立体定位方法注入溶液。当使用3-50 nL体积时，注射后在原位停留1-5分钟，以避免形成针道。然后，使用立体定位臂提起移液器或注射器。
2. 对多个靶点重复步骤3.1。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
斜角镊子，Dumont 5/45	FST	11251-35	仅用于夹持硬脑膜
弹簧剪刀，Vannas 2.5 mm，附带收纳盒	FST	15002-08	剪刀仅用于切开硬脑膜，收纳盒用于抬高动物体位
立体定位微操纵器	Kopf	1760-61	连接电极夹持器，根据坐标调整位置
立体定位“U”型框架组件及细胞内记录基板	Kopf	1730-B, 1711	手术用框架
无菌棉签	Puritan	25-806 10WC	用于吸收手术区域的血液