通过子宫内纳米注射在小鼠胚胎模型中操控神经板细胞

本文内容

摘要

本视频展示了在小鼠胚胎模型中针对神经板进行宫内纳米注射的方法。将高滴度的慢病毒溶液注射到羊膜腔中，使其整合到神经板细胞内，从而实现神经发育研究和治疗应用中的稳定基因操作。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 注射

注意：本实验中使用的所有器械均需在手术前以及每只小鼠之间进行灭菌处理。

对具有理想大小腔隙的第一只雌性动物进行麻醉。
将雌性动物放置于手术台上并固定。
在眼睛上涂抹眼用凝胶以防止角膜干燥，并皮下注射镇痛药物。
注意：推荐镇痛药：布托啡诺（0.05–0.1 mg/kg 体重）或氟尼辛（2.5 mg/kg）或类似药物，具体应符合当地动物福利法规。围手术期多模式镇痛通过注射镇痛药和异氟烷维持。
使用浸有 0.5 mg/mL 氯己定溶液（或类似物）的布巾无菌擦拭下腹部，并擦干皮肤。使用手术剪在下腹部做一条 1.5–2.0 cm 的垂直正中皮肤切口。
注意：应按照当地批准的消毒程序准备手术区域。
轻柔提起皮肤，并将切口周围约 1 cm 范围内的皮肤与下方肌肉层分离，以便术后缝合。
在肌肉层做一条 1 cm 的垂直正中切口。
用一对镊子提起一侧的皮肤和肌肉层，用另一对镊子寻找子宫角。
注意：蜕膜排列如同项链上的珠子，而肠道则为一条长而连续的管道（图 1A）。
用镊子小心地将两侧子宫角从腹腔中拉出....

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结果

图1：成功注射时羊膜腔的最佳大小和方向。（A）多个E7.5天的蜕膜组成的子宫角，形状类似一串球体（下方），与大肠（上方）对比。（B）用镊子夹住蜕膜之间的子宫组织（白色虚线所示）。避免直接用镊子挤压蜕膜（白色箭头所示），因为在此早期阶段，蜕膜和发育中的胚胎.......

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材料

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