在大鼠模型中注射自组装肽和神经前体细胞以修复脊髓损伤

摘要

来源：Zweckberger, K., et al. 神经前体细胞与自组装肽在实验性颈段脊髓损伤中的协同应用。 J. Vis. Exp. (2015)。

本方案展示了一种在大鼠模型中用于脊髓损伤修复的靶向注射方法。该方法包括将自组装多肽（SAPs）注入损伤核心区域以形成支持性支架，随后在损伤周围区域注射神经前体细胞（NPC），以实现组织重塑。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 颈部动脉瘤夹损伤/压迫模型

1. 手术前，将器械进行高压灭菌，并在整个手术过程中将其置于70%酒精浴中以保持无菌状态。
2. 使用氧气（O₂）、一氧化二氮（N₂O）（1:1）和1.8–2.2%异氟烷的混合气体对Wistar大鼠（250–270 g）进行麻醉，并通过气体麻醉面罩维持自主呼吸。诱导麻醉时，先使用5%异氟烷持续1分钟，随后降低浓度。手术开始前，通过施加疼痛刺激（例如在足部）来检测麻醉深度。在眼部涂抹油脂类软膏，以防止角膜干燥及继发感染。
3. 将大鼠置于加热垫（37 °C）上，并将其头部固定于立体定位仪中。
4. 剃除颈椎周围的手术区域毛发，并使用聚维酮碘和70%酒精进行消毒。
5. 从颈椎第2节（C2）开始，沿脊柱正中线做切口，延伸至胸椎第2节（T2）明显的棘突处。
6. 沿正中线方向纵向切开椎旁肌的表层（以避免出血），并钝性分离深层肌肉组织，直至暴露棘突和椎板。插入牵开器。
7. 以T2椎体明显的棘突为定位标志，确定椎板切除的目标节段。在显微外科技术下辨认并分离选定的椎板后，剪开黄韧带以松解椎板和棘突。最后，使用骨剪在脊髓侧方剪断椎板，并轻柔移除，避免对脊髓本身造成压迫。
   注意：最常见的损伤节段为C5/6、C6/7或C7/T1。损伤节段越靠近头侧，围手术期死亡....

结果

图1：夹闭挫伤/压迫性动脉瘤模型。 (A) 大鼠C7/T1椎板切除术后，通过手术显微镜拍摄的脊髓夹闭挫伤/压迫部位照片。(B) 带有环形弹簧的夹子图片，该弹簧可确保精确的闭合压力。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
动脉瘤夹	SharpTech
手术显微镜	Leica
显微注射系统	World Precision Instruments, Inc.
小型动物立体定位仪	David Kopf Instruments
哈密顿注射器	Hamilton公司
手术器械	精细科学工具
异氟烷 USP	加拿大制药合作伙伴公司
0.9% 氯化钠注射液 USP	Baxter
7.5% 聚维酮碘	普渡制药
70% Isopropyl alcohol USP	GreenField 乙醇公司
QL6 SAP	Covidien