小鼠坐骨神经挤压损伤后的轴突再生

摘要

来源： 李 Q. 等研究哺乳动物轴突再生： 体内 成年小鼠背根神经节的电穿孔 视频实验杂志 (2018)

本视频展示了小鼠坐骨神经在挤压损伤后轴突再生的过程。分离的神经经过固定和成像前处理，并利用神经元中表达的荧光蛋白来观察轴突生长。通过落射荧光显微镜，追踪从损伤部位开始的轴突再生情况，以评估再生程度。

方案

1. 材料与试剂

1. 动物
   1. 使用6周龄、体重30–35 g的雌性CF1小鼠进行实验。
      注意： 小鼠以每笼5只的密度群养于独立通风的灭菌笼具中，笼内铺有1/4英寸玉米芯垫料，并提供2英寸见方的筑巢垫料用于筑巢。笼具环境维持在12小时光照-12小时黑暗的可控光周期条件下，室温保持在19.4 °C至25 °C之间。小鼠饲喂标准啮齿类动物饲料，并通过自动供水系统提供饮水。
2. 仪器
   1. 使用以下手术器械可高效完成手术：一次性注射器（27 G，1.0 mL，用于腹腔注射）、毛发剪、体视显微镜、显微外科镊、显微外科剪、小型咬骨钳以及无菌非织造海绵。
      注意： 所有器械和材料在手术前均经过高压灭菌或由生产商预先灭菌。手术过程中，器械需用75%酒精喷洒以维持无菌状态。
3. 麻醉溶液
   1. 使用麻醉液#1诱导麻醉，并在背根神经节（DRG）注射前使用麻醉液#2以维持麻醉状态。
      1. 配制麻醉溶液....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
ECM 830 方波电穿孔系统	BTX Harvard Apparatus	45-0052	用于体内电穿孔
镊状电极（Tweezertrodes electrodes）	BTX Harvard Apparatus	45-0524	用于体内电穿孔，1 mm 平头
Picospritzer III	Parker Instrumentation	1096	细胞内微量注射给液系统
玻璃毛细管拉制仪	NARISHIGE	PC-10
硼硅酸盐玻璃毛细管	World Precision Instruments, Inc.	1902328
体视解剖显微镜	Leica	M80
显微外科咬骨钳	F.S.T	16221-14
显微外科镊	FST by DUMONT, Switzerland	11255-20	仅用于坐骨神经压伤
玻璃毛细管	World Precision Instruments, Inc.	TW100-4	10 cm，标准壁厚
胶带	Fisherbrand	15-901-30	用于将小鼠固定在软木板上
2,2,2-三溴乙醇（Avertin）	Sigma-Aldrich	T48402	Avertin 储存液
2-甲基-2-丁醇	Sigma-Aldrich	152463	Avertin 储存液
siRNA 荧光通用阴性对照 #1	Sigma-Aldrich	SIC003	非靶向荧光标记 siRNA
携带 Dy547 的 microRNA 模拟物转染对照	Dharmacon	CP-004500-01-05	非靶向荧光标记 microRNA
质粒制备试剂盒	Invitrogen Purelink	K210016	编码 GFP 质粒的制备
快绿染料	Millipore-Sigma	F7252	用于注射过程中更好地观察背根神经节轮廓
氯胺酮	Putney, Inc	NDC 26637-731-51	麻醉诱导
赛拉嗪	AnaSed	NDC 59399-110-20	麻醉诱导
对乙酰氨基酚	McNeil Consumer Healthcare	NDC 50580-449-36	术后镇痛