来源：Furmanski, O., et al. 小鼠脑损伤的可控皮层冲击模型结合人诱导多能干细胞来源的神经细胞治疗性移植. J. Vis. Exp. (2019)
在本视频中，将人源诱导性多能干细胞衍生的神经细胞通过立体定位法注射至创伤性脑损伤小鼠模型深部皮层的灰质-白质交界处。移植的细胞可整合入组织，促进损伤脑组织的功能恢复和神经环路修复。
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方法文章
立体定向移植神经细胞悬液至创伤性脑损伤小鼠
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2025年8月29日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。
1. 细胞悬液的立体定位移植
- 在颅骨切除术后约24小时开始细胞移植操作。
- 准备细胞移植设备和手术用品
- 用无菌生理盐水填充一支1 mL滑动式针筒，用于冲洗伤口。在针筒上安装25 G针头以控制冲洗过程。
- 用环孢素A（CsA）溶液填充另一支1 mL滑动式针筒，用于免疫抑制。在CsA针筒上安装25 G或更大规格的针头。根据需要在各次手术之间重新填充CsA针筒。
- 使用外径为1.0 mm的硼硅酸盐玻璃毛细管，按照标准方法制备玻璃针头。
- 使用精细镊子将针尖折断至直径约为200 µm。确保针头圆柱部分长度不超过2.5 cm。
- 校准针筒泵，使其适用于10 µL针筒。设定流速为0.2 µL/min，以输送总量为2.0 µL的液体。
- 制备人诱导多能干细胞（hiPSC）悬液。
- 所有细胞操作均应在生物安全二级（BSL-2）细胞培养罩内，采用标准无菌操作技术进行。
- 根据细胞类型的特定标准条件提前准备细胞培养物。
注意：本演示中所示实验使用了由hiPSCs衍生的多种神经表型细胞。 - 使用细胞解离溶液或其他合适的酶法或化学方法，将细胞轻柔地....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 1 毫升注射器 | Becton Dickinson (BD) | 309659 | |
| 1.7 毫升翻盖式试管 | Denville | C2170 | |
| 10 微升注射器 | Hamilton | 7635-01 | |
| 25G 精密滑动注射针头 | Becton Dickinson (BD) | 305122 | |
| 70% 乙醇 | 可选产品；因地区而异 | ||
| 对乙酰氨基酚口服混悬液 | Tylenol (儿童用) | 用水稀释至 1 mg/ml | |
| 麻醉气体蒸发器 | Vetland | 0521-11-22 | |
| 动物操作布巾 | 可从百货商店购买 | ||
| 聚维酮碘（Betadine） | Purdue Products | NDC-67618-151-32 | |
| 压缩氧气 | 可选产品；因地区而异 | ||
| 环孢素 A | Sigma-Aldrich | 30024-100mg | |
| 二甲基亚砜（DMSO） | Sigma-Aldrich | D8418-500ml | |
| DMEM | Invitrogen (ThermoFisher) | A14430-01 | |
| 电工胶带 | 3M Corporation | 可从百货商店购买 | |
| 精细镊子 | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| 镊子 | Fine Science Tools | 91106-12 | |
| 玻璃毛细移液管，外径 1 mm，内径 0.58 mm | World Precision Instruments | 1B100F-3 | |
| 高速旋转微型电机套件 | Foredom Electric Co. | K.1070 - K.107018 | |
| 理想微型钻头套装（5 件装） | Cell Point Scientific | 60-1000 | |
| CCI 用 Impact One 立体定位撞击器 | Leica Biosystems | 39463920 | |
| 异氟烷 | Baxter | NDC-10019-360-60 | |
| 实验台计时器 | Fisher Scientific | 14-649-17 | |
| 微量移液管拉制仪 | MicroData Instruments, Inc. | PMP-102 | 任意型号均可满足需求 |
| 显微镜盖玻片 | Fisherbrand | 12-545-E | |
| 显微镜载玻片封片介质 | 可选产品 | ||
| 镜子 | 可从百货商店购买 | ||
| 持针器止血钳 | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| 眼科软膏 | Falcon Pharmaceuticals | NDC-61314-631-36 | |
| 眼科弹簧剪刀 | Fine Science Tools | 15018-10 | |
| 塑料盒 | 可从百货商店购买 | ||
| 塑料圆筒 | 可从百货商店购买 | ||
| QSI 电动注射泵 | Stoelting | 53311 | |
| 可拆卸针头压缩接头 | Hamilton | 55750-01 | |
| 小型啮齿类动物立体定位仪 | Stoelting | 51925 | |
| 小型剪刀 | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| StemPro Accutase | Invitrogen (ThermoFisher) | A1110501 | |
| 无菌酒精擦拭垫 | Fisherbrand | 06-669-62 | |
| 无菌棉签/Kendall Q-tips | Tyco Healthcare | 540500 | |
| 无菌生理盐水 | Hospira | NDC-0409-1966-07 | |
| 秒表（2 个） | Fisher Scientific | 06-662-56 | |
| Superfrost Plus Gold 显微镜载玻片 | Fisherbrand | 15-188-48 | |
| 缝合线 — 5.0 丝线带弯针 | Oasis | MV-682 |
