来源： Lutz, D., et al. 在子宫内转导发育中小鼠脑和脊髓后超微结构神经可塑性参数的评估。 J. Vis. Exp. (2019)。
本视频演示了通过子宫内注射在小鼠胚胎中进行病毒转导的方法。将怀孕小鼠进行手术准备，沿中线做切口以暴露子宫角。将含有目的基因的病毒与示踪染料的混合物注射到子宫囊内特定位置的胚胎中。随后将子宫角复位并缝合切口。
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方法文章
子宫内小鼠病毒转导
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2025年8月29日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 子宫内转导
- 制备编码目标序列的1型腺相关病毒（AAV1）（4 x 1011 磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）中含病毒颗粒/µL的AAV1，加入0.1 mg/µL Fast Green，将AAV1-Fast Green混合物置于37 °C保存。
- 使用拉针仪制备所需形状的细毛细管尖端（长度为 8 mm，外径为 80 µm，内径为 50 µm）（参数设置：压力 = 500，加热 = 700，拉力 = 0，速度 = 80，时间 = 200，参见 材料表）。折断毛细管尖端，使其长度为4-5 mm。
- 组装一根吸管（44 cm × 0.7 cm），连接毛细管尖端，并将15 µL AAV1-Fast-Green混合物吸入毛细管中。
- 在整个实验过程中，保持实验动物的生理体温恒定在 37 °C。
- 将一只妊娠第14.5天的C57Bl/6小鼠放入预孵育室，用4%异氟烷气体（体积空气流速为0.6–0.8 L/min）麻醉小鼠。
- 皮下注射布托啡诺（0.1 mg/kg 体重）。
- 将麻醉后的小鼠置于预热的手术板（37 °C）上。
- 用润滑剂覆盖眼睛。
- 将小鼠置于手术板上，连接麻醉面罩（使用体积流速为 0.6–0.8 L/min 的 1.5% 异氟烷气体），....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 26G×1英寸针头 | Henke-Sass, Wolf GmbH | ||
| 410型麻醉泵用空气泵单元 | Biomedical Instruments (Univentor) | 8323102 | |
| 腺相关病毒血清型1（AAV1） | UKE（病毒核心设施） | - | 有关AAV1的参考文献和靶向区域，请参见：https://www.addgene.org/viral-vectors/aav/aav-guide/ 以及：Designer gene delivery vectors: molecular engineering and evolution of adeno-associated viral vectors for enhanced gene transfer. Kwon I, Schaffer DV. Pharm Res. 2008 Mar;25(3):489-99. 重组腺相关病毒载体（假型化为血清型1、2和5的病毒衣壳）在递送至中枢神经系统不同区域后表现出不同的转导效率和细胞趋向性。Burger C, Gorbatyuk OS, Velardo MJ, Peden CS, Williams P, Zolotukhin S, Reier PJ, Mandel RJ, Muzyczka N. Mol. Ther. 2004 Aug;10(2):302-17. 自互补型重组腺相关病毒（scAAV）载体可在不依赖DNA合成的情况下实现高效转导。McCarty DM, Monahan PE, Samulski RJ. Gene Ther. 2001 Aug;8(16):1248-54. |
| 空气泵 | Biomedical Instruments (Univentor) | Eheim 100 | |
| 吸液调节组件 | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| 小鼠用阳极氧化铝呼吸面罩 | Biomedical Instruments (Univentor) | - | |
| 布托啡诺 | Temgesic | 安瓿 | 镇痛药 |
| 毛细管 | Science-Products | GB100TF-10 | 带填充丝 |
| 杜蒙特镊子（#3，12 cm，直头，0.2 × 0.12 mm） | FST | 11203-23 | |
| 电动剃须刀 | Philips | - | |
| 爱惜康缝线（Ethilon，6-0 和 3-0） | Ethicon | - | 聚酰胺 |
| 眼用润滑剂 | Bepanthene | - | |
| 快绿染料 | Sigma-Aldrich | F7252 | 用于可视化注射液体 |
| 气体通路切换器 4/2 接口 | Biomedical Instruments (Univentor) | 8433020 | |
| 哈尔斯特德蚊式止血钳（12.5 cm，直头） | FST | 13011-12 | |
| 带水平滑动盖的小鼠诱导箱。内部尺寸：长×宽×高：155×115×130 mm。壁厚：6 mm | Biomedical Instruments (Univentor) | - | |
| 虹膜镊（10 cm，弯头，带齿） | FST | 14007-14 | |
| 虹膜剪（11 cm，直头，碳化钨） | FST | 14501-14 | |
| 异氟烷操作台，电加热，小型。外部尺寸：257×110×18 mm。加热区域：190×90 mm。逸出呼吸面罩的异氟烷向下排放，符合相关法规要求 | Biomedical Instruments (Univentor) | - | |
| 异氟烷（Attane） | JD medical | 吸入麻醉剂 | |
| 基础型光学显微镜 DM E | Leica | - | 配备4×（数值孔径0.1 ∞/-）、10×（数值孔径0.22 ∞/0.17）、40×（数值孔径0.65 ∞/0.17）、100×（数值孔径1.25 ∞/0.17）物镜 |
| 微电极拉制仪 | Science-Products | P-97 | |
| 蚊式止血钳（12.5 cm，弯头） | FST | 13010-12 | |
| 热拉制仪 P-97 | Sutter Instruments | ||
| Tygon 6/4 管路材料，用于连接所有部件。外径：6 mm，内径：4 mm，壁厚：1 mm | Biomedical Instruments (Univentor) | ||
| 万纳斯剪（8 cm，直头） | FST | 15009-08 |
