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所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
选用8周龄的雄性C57BL/6N小鼠。
1. 术前准备
- 确保备有足够的经高压灭菌的外科手术器械、设备、镇痛药物和麻醉药物。
- 确保手术台上留有足够的操作空间。
- 使用尿布包裹的定制外科泡沫板作为小鼠手术床，准备手术台。用医用胶带将加热垫固定在泡沫板上，并用无菌纱布覆盖加热垫。
- 使用血管钳弯曲一根 acupuncture 针，将其对折，再将对折后的针尖弯成钩状，制成牵开器。在 acupuncture 针末端固定一条橡胶条，并用图钉将橡胶条的末端固定在泡沫板上。
- 校准体视显微镜；选择具有足够工作距离的体视显微镜。用灭菌的铝箔覆盖变焦/聚焦按钮，以便术者在手术过程中进行调节。将灭菌铝箔覆盖在变焦/聚焦按钮上，使术者能够戴无菌手套操作。
2. 小鼠麻醉与准备
- 称重小鼠，并根据其体重进行麻醉（异氟烷 3%）。通过夹捏其足垫间区域以确认麻醉深度，若小鼠无反应，则表明麻醉充分。整个手术过程中应维持适当的麻醉深度（异氟烷 1%）。
- 双侧眼球涂抹眼膏，以防止手术期间角膜受到刺激或干燥。
- 使用自动剃毛器剃除颈部和胸部的毛发，准备手术区域。清除并清理松散的毛发。
- 将小鼠仰卧置于覆盖无菌纱布的加热垫上。整个手术过程中维持小鼠体温在 37 °C。使用医用胶带固定小鼠，使其前肢水平外展，并防止后肢和尾巴移动。在小鼠体表覆盖带有适当开口的无菌一次性手术巾。
3. 手术步骤
- 注射曲马多作为预先镇痛（20 mg/kg，腹腔注射或i.p.）。在锁骨上缘标记横切口位置。使用碘伏消毒液和乙醇交替擦拭三个循环，对术区进行消毒。术前通过脚趾夹捏试验确认麻醉深度。
- 在显微镜下操作，使用无菌手术刀沿标记线做一4 mm的横向切口。根据手术需要，在操作过程中可适当扩大切口。
- 钝性分离皮下筋膜，辨认下颌下腺的下缘。将下颌下腺向上牵拉，暴露锁骨上窝和胸骨。
注意：该区域可能存在小口径血管。可使用电凝止血。 - 沿中线从头侧向尾侧切开胸骨，行部分正中胸骨切开术（约4 mm）。在胸骨切开过程中注意保护胸膜、心脏及血管。
- 辨认胸骨舌骨肌。使用两把由针灸针自制的小型牵开器轻柔牵开胸骨，暴露气管和食管上方的胸骨舌骨肌。将该肌牵开，以显露颈总动脉、颈内静脉、膈神经、迷走神经、气管和食管。
注意：应轻柔牵拉胸骨，避免发生开放性气胸。与人类不同，小鼠的食管并不位于气管后方，而是位于气管左侧并与其相邻。 - 辨认左侧臂丛神经。在左侧颈内静脉外侧缘，将筋膜和脂肪组织向外牵拉，暴露臂丛神经。寻找由颈段C5和C6神经组成的上干，其具有三个分支。沿上干向尾侧继续辨认由C7神经组成的中干，以及由C8和胸段T1神经组成的下干。
注意：臂丛神经表面有纵向走行的血管。可使用电凝防止出血。分离左侧臂丛神经时，应注意保护乳糜管，避免形成乳糜瘘。 - 获取左侧C7神经。在锁骨下方，将中干（C7神经）的前支和后支远端分离至分支汇合为神经束的水平，并通过局部注入0.1 mL 2%利多卡因阻滞C7神经。使用Vannas弹簧剪在C7神经与外侧束和后束汇合处将其切断。修剪C7神经，使各分支长度相近。
注意：C7神经的前支和后支，以及上下干的前后分支在汇合前走行较长，因此应在切除前充分游离C7神经。实际上，C7神经并不总是分为两支；有时可分为三支，极少数情况下甚至可分为四支。 - 切除左侧C6椎体腹侧板。小心保护膈神经，在C6节段水平切断前斜角肌，以暴露C7神经根。使用显微镊剪断C7神经支配椎旁肌的小分支。轻柔牵出C7神经，并小心切除C6椎体腹侧板。
注意：左侧颈总动脉内侧与食管外侧之间存在一个骨性突起，此即第六颈椎的腹侧板。C6椎体腹侧板外侧缘的纵行肌肉为前斜角肌，膈神经走行于前斜角肌表面。 - 获取右侧C7神经。在右侧同样切断前斜角肌，并在靠近椎间孔处横断右侧C7神经根。从其分支水平开始游离右侧C7神经。
注意：应小心切断右侧C7神经，防止损伤神经下方的血管。 - 转移左侧C7神经。
- 部分切除椎体两侧的颈长肌。钝性分离并扩大气管-食管与椎体之间的间隙。
- 将一根对折的5-0尼龙缝线从椎体右侧经椎前路径穿至左侧。
- 用适当粗细的塑料输液管钩住左侧C7神经，并经椎前路径引导至右侧。
- 轻柔牵开气管和食管，使用12-0尼龙缝线在无张力条件下将左侧C7神经的前支和后支与右侧C7神经根对接。在神经周围外膜缝合4–5针，以牢固吻合神经。
注意：选择合适直径的塑料输液管至关重要。管径过细可能损伤神经，过粗则可能压迫气管和食管。此外，气管-食管与椎体之间的间隙呈“V”形，切除部分颈长肌可缩短神经移植物的转移路径。
4. 伤口闭合
- 用无菌生理盐水冲洗伤口，并用无菌纱布擦干。
- 用5-0单股缝线缝合胸骨并关闭皮肤。
5. 术后护理
- 等待小鼠从麻醉中苏醒。将小鼠转移至一个无垫料但用加热毯预热过的清洁笼具中。观察小鼠直至其能够自主活动。术后使用曲马多（20 mg/kg，腹腔注射）作为镇痛药物。
- 将小鼠放入恢复笼中并持续监测直至完全恢复。手术后恢复小鼠的饮水和饮食。术后每天监测小鼠是否出现功能障碍或感染迹象，包括营养不良、弓背姿势和毛发凌乱。术后两周时应进行缝线拆除。
注意：连续三天每日在伤口表面涂抹红霉素软膏。 - 若观察到任何并发症（如伤口水肿），应立即处理。