利用透射电子显微镜观察蓝细菌胞外囊泡

摘要

来源：Biller, S. J., et al．蓝细菌胞外囊泡的分离与表征．J. Vis. Exp. (2022)

本视频展示了通过负染色法制备蓝细菌胞外囊泡以用于透射电子显微镜观察，从而实现对囊泡形态、大小和纯度的高分辨率可视化，适用于结构分析和比较研究。

方案

1. 分离囊泡的表征

1. 进行负染透射电子显微镜观察（参见材料表）（TEM—透射电子显微镜；用于检测颗粒大小、结构及纯度）。
   1. 为提高图像质量，根据制造商的说明，使用辉光放电系统对预先镀膜的透射电镜载网表面进行辉光放电处理（参见材料表）。
   2. 小心加入约 5 µL 囊泡样品，静置 5 分钟。
      注意：囊泡浓度高于>10⁹ mL^-1 的样品通常可获得最佳结果；浓度较低的样品每张图像中囊泡数量较少。
   3. 用干净滤纸轻轻接触载网边缘，吸除样品。
   4. 将 20–50 µL 的 2% 醋酸铀酰溶液（参见材料表）滴加至覆有塑料膜的平坦表面，将载网漂浮于液滴上 2 分钟。
   5. 用滤纸吸除醋酸铀酰溶液，随后将载网在超纯水液滴上短暂漂洗一次；重复水洗步骤一次。
      注意：完成步骤 1.1.5 后，最终干燥的载网即可用于观察。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2% 醋酸铀酰溶液	Electron Microscopy Sciences	22400-2	负染色 - 透射电子显微镜
碳支持膜 200 目，铜网。CF200-Cu	Electron Microscopy Sciences	71150	透射电子显微镜（TEM）载网
easiGlow Glow Discharge Cleaning System	Ted Pella	91000	商用 TEM 载网辉光放电清洗仪
Milli-Q Reference 水净化系统	Merck	Z00QSV0WW	用于制备 I 型超纯水的水净化系统
透射电子显微镜	JEOL	JEM-1400	或性能相当的显微镜