使用透射电子显微镜可视化蓝藻细胞外囊泡

Abstract

资料来源：Biller， SJ 等人。蓝藻细胞外囊泡的分离和表征。J. Vis. Exp.（2022年）

该视频演示了通过负染色制备用于透射电子显微镜的蓝藻胞外囊泡，从而能够对囊泡形态、大小和纯度进行高分辨率可视化，以进行结构和比较分析。

Protocol

1. 分离囊泡的表征

1. 进行负染色透射电子显微镜（见 材料表）（TEM - 透射电子显微镜;粒径、结构、纯度）。
   1. 为了提高图像质量，请根据制造商的指南使用辉光放电系统对前涂层 TEM 网格的表面进行辉光放电（参见 材料表）。
   2. 小心地涂抹~5μL囊泡样品，静置5分钟
      >注意：囊泡浓度为>10^{9 mL-1}的样品通常会产生最佳结果;更稀释的样品每个图像的囊泡很少。
   3. 通过将网格的边缘接触一张干净的滤纸来取出样品。
   将
   4. 20-50 μL 2% 乙酸铀酰滴入（参见 材料表）滴到被塑料薄膜覆盖的平坦表面上，并将网格漂浮在其上 2 分钟。
   5. 使用滤纸去除乙酸铀酰，并短暂漂浮在一滴超纯水上进行清洗。重复第二次水洗。
      注意：在步骤 1.1.5 后，最终的干网格已准备好进行可视化。

Materials