使用仿生珠评估细菌-宿主细胞相互作用

摘要

资料来源：Stones， DH， et al.用于表征细菌与宿主相互作用的仿生材料。J. Vis. Exp.（2015年）

该视频演示了在竞争条件下使用拟菌珠来量化细菌对宿主上皮细胞的粘附。它概述了处理细胞、裂解细胞和接种连续稀释液以测量菌落形成单位所涉及的步骤。

方案

1. 细菌粘附的测量
   1. 在指定的时间点（例如，感染后 1 小时），从细胞层中取出培养基。
   2. 用无菌、预热的磷酸盐缓冲盐水（PBS）（至少洗涤3-4次，每次1ml PBS）彻底洗涤细胞层，以去除任何未附着的细胞。
   3. 通过每孔在PBS中加入1ml无菌1%v / v Triton X-100溶液来裂解宿主细胞。将板在37°C下孵育5分钟。
   将
   4. 每个样品上下移液数次，然后将每个孔的内容物转移到单独的 1.5 ml 管中。将样品的 10 倍连续稀释液制备到无菌 PBS 中（例如，使用 100 ml 样品和 900 ml PBS）。
   将
   5. 每个样品的100μl接种在海洋Luria-Bertani（MLB）琼脂上，并使用细胞扩散器铺展。根据细菌菌株和时间点优化要铺板的稀释液。
      注意：对于所描述的实验设置，10⁵ 或 10⁶ 倍稀释液可提供合适数量的菌落形成单位 （CFU）。
   在
   6. 37°C O / N下孵育板，并通过菌落计数计数细菌。

材料