利用不连续密度梯度根据荚膜含量分离细菌

摘要

来源：Feltwell, T., 等. 利用不连续密度梯度按荚膜含量分离细菌。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了利用不连续密度梯度根据荚膜含量分离细菌菌株的方法。通过将转座子突变文库在梯度介质中离心，具有不同荚膜密度的细菌会定位至不同的层。随后可收集分离的组分用于下游分析。

方案

1. 将制备好的细胞加入梯度液并进行离心分离

1. 将600 µL制备好的细胞缓慢加入离心管中梯度液的上层，注意不要搅动界面。
2. 将试管放入试管适配器中，并称量适配器与试管的总重量，以确保配平。
   1. 将试管适配器放入台式离心机的固定角转子中。在3,000 x g条件下离心30分钟 g.
   2. 离心后，小心取出离心管，放入合适的试管架中，并对结果进行拍照记录。
3. 回收细菌组分用于尿酸定量或DNA提取。
   1. 如果不需要进行后续应用，则处理掉样品/梯度溶液 通过 实验室中适当的液态生物废弃物处理途径
      注意： 对新物种/菌株的细菌进行分离验证非常重要。应通过显微镜检查、糖醛酸测定或其他合适的定量分析方法检测密度梯度中的各个组分，以确认每组分的荚膜表型。如果分离目的是基于聚集状态或细胞大小，则应采用独立且适当的分析方法。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
佩科尔溶液	GE Healthcare	17-0891-01
配备 A-4-81 转子和 500 ml 桶的 Centrifuge 5810R 离心机	Eppendorf	5810 718.007
15 ml 管适配器	Eppendorf	5810 722.004
固定角转子 F-34-6-38	Eppendorf	5804 727.002
2.6 - 7 ml 管适配器	Eppendorf	5804 739.000
Centrifuge 5424 离心机（含转子 FA-45-24-11）	Eppendorf	5424 000.460
5 ml 聚丙烯圆底管	Falcon	352063