斑马鱼胚胎中生物材料相关细菌感染的荧光成像

摘要

来源： Zhang, X., 等斑马鱼胚胎体内可视化与活体分析生物材料相关性的模型 金黄色葡萄球菌 感染。 视频实验杂志 (2019)

本视频展示了注射了金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的斑马鱼胚胎的荧光成像，可用于定量分析感染进程和细菌分布，从而评估生物材料微球对体内宿主-病原体相互作用的影响。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 斑马鱼胚胎感染进展及诱导细胞浸润的荧光显微镜观察

1. 将胚胎置于含有0.02%（w/v）3-氨基苯甲酸（Tricaine）的100 mm培养皿中以进行麻醉。5分钟后，将胚胎转移至覆盖有含0.02%（w/v）Tricaine的E3培养基的琼脂糖平板上，并将其排列为同一方向以便注射。用移液器将500 µL PBS（磷酸盐缓冲盐水）-2%（wt）甲基纤维素溶液加入含有含0.02%（w/v）Tricaine的E3培养基的培养皿中。将胚胎放入甲基纤维素溶液中，保持其笔直且水平。
   注意： 甲基纤维素溶液用作一种“胶水”，因其具有黏性，可暂时固定胚胎，使其处于最适合成像的最佳方向。
2. 使用配备明场、mCherry、绿色荧光蛋白（GFP）和紫外（UV）滤光片的体视荧光显微镜，在相同优化条件下对单个胚胎进行成像（例如, 在160倍放大倍数下设置图像采集参数（包括亮度、增益和曝光时间）。使用明场滤光片，调整焦平面以清晰对焦注射造成的组织损伤区域。设置Z轴扫描深度为10 µm，步进间距为5 µm，以便连续记录3幅图像。
3. 从注射后5小时起至注射后2天，每天对各个胚胎进行一次成像。排除已死亡的胚胎（无心跳或胚胎部分降解）不再进行后续成像与分析。将胚胎单独置于48孔板中的E3培养基中培养，每天更换培养基。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10 µm 直径的聚苯乙烯微球（蓝色荧光）	Life technology/ThemoFisher	F8829
3-氨基苯甲酸（Tricaine）	Sigma-Aldrich	E10521-50G
立体荧光显微镜 LM80	Leica	MDG3610450126
甲基纤维素 4000cp	Sigma-Aldrich	MO512-250G
培养皿	Falcon	353003
培养皿	Biomerieux	NL-132
ImageJ	不适用	不适用	链接: https://imagej.nih.gov/ij/download.html
GraphPad 7.0	Prism	不适用