一种检测硫化氢细菌的灵敏视觉方法

Abstract

资料来源： Zhu， W. 和 Chu， W. 检测硫化氢细菌的灵敏视觉方法。 J. Vis. Exp. （2022年）

该视频演示了一种用于快速检测产生硫化氢的细菌的灵敏视觉方法。颜色从黄色变为黑色表明细菌通过形成硫化铋而活动。

Protocol

1. 细菌菌株

注意：本实验使用了9株标准菌株，包括A型副伤寒沙门氏菌、B型副伤寒沙门氏菌、核梭杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌PAO1、嗜水气单胞菌YJ-1、Vuigaris变形杆菌和肺炎克雷伯菌。副伤寒沙门氏菌A、核梭杆菌、铜绿假单胞菌和无形杆菌可以产生 H₂S。

1. 细菌培养物的制备
   1. 将 A 型副伤寒沙门氏菌、B 型副伤寒沙门氏菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 PAO1、嗜水气单胞菌 YJ-1 和肺炎克雷伯菌的一个菌落从 Luria-Bertani （LB） 琼脂平板转移到 100 mL LB 培养基中，并在 37 °C 下培养 12-16 小时，直到细菌浓度约为 1 x 10⁹ 个细胞/mL（如 OD₆₀₀= 1）。
   2. 将核梭杆菌和无核变形杆菌的一个细菌菌落从胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）琼脂平板转移到100mL TSB培养基中，并在37°C下厌氧培养24小时，直到细菌浓度约为1 x 10⁹个细胞/ mL（如OD₆₀₀ = 1所示）。

2. H₂S检测测定

1. 硫化氢生产试验
   1. 将 100 μL 细菌培养物与 100 μL 新制备的铋溶液（pH 8.0、10 mM 氯化铋 （III）、0.4 M 三乙醇胺-HCl、20 mM 吡哆醛 5-磷酸一水合物、20 mM EDTA（乙二胺四乙酸）和 40 mM L-半胱氨酸）混合在 96 孔微量滴定板中，并在 37 °C 下培养 20 分钟。对于每种细菌菌株，一式三份进行分析。
   2. 20 分钟后，检查颜色变化。如果溶液的颜色从浅黄色变为黑色，则表明细菌能够产生H₂S。重复此测量3次。
2. 方法的灵敏度
   1. 使用不同浓度的硫化氢钠（NaHS）确定方法的灵敏度：2 mM、1 mM、0.8 mM、0.6 mM、0.4 mM、0.2 mM、0.1 mM 和 0 mM，与BS（硫化铋）溶液混合。
   2. 通过观察黑色 BS 沉淀物的形成来确定 HS⁻/S²⁻ 的存在。使用从无颜色产生 （-） 到最深黑色产生 （++++++） 的视觉刻度对孔的颜色进行评分。

Materials