利用生物发光技术追踪小鼠体内细菌感染动态

摘要

来源： Valentine, M. E., 等 框内基因缺失突变体的构建 铜绿假单胞菌 并在简单的小鼠感染模型中检测毒力减弱情况。 J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了利用生物发光技术在活体小鼠中可视化并比较毒力菌株与减毒菌株的行为。视频概述了生物发光菌液的制备及其对小鼠的腹腔注射过程。毒力菌株表现出系统性扩散，而减毒菌株则局限于局部并逐渐被清除，后者表现为发光信号逐渐减弱。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 通过注射对动物进行菌株接种
   1. 在注射当天早晨，取出待测菌株的冻存管，在 4 °C 下解冻 3–4 小时。每只待注射小鼠准备 0.5 mL。解冻后立即将冻存管置于冰上，并在 2 小时内完成小鼠注射。
   2. 解冻后，将每支冻存管中的菌液转移至新的 2 mL 离心管中，在 4,500 × g 条件下离心 10 分钟，弃去上清液，并将菌体沉淀重悬于 1 mL 的 1× PBS（磷酸盐缓冲液）中。
   3. 再次在 4,500 × g 条件下离心 10 分钟，弃去上清液，将沉淀用 1× PBS 重悬，调整终浓度为 2.5 × 10⁹ CFU/mL（CFU：菌落形成单位）。不同菌株所需 1× PBS 的具体体积可能略有差异。
      1. 从每种菌株的最终悬液中取 3 份样品，按照前述方法验证 CFU/mL、基因型和表型。
   4. 针对每种菌株，将 1.5 mL PBS/菌悬液分装至每 5 只小鼠使用一支 2 mL 离心管，以减少反复开启同一管造成的污染风险。同时，准备用于对照注射的 1× PBS 管。
   5. 准备小鼠（本实验每组 10 只雄性和 10 只雌性 C57BL/6 小鼠）及注射所需材料....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.2 mL 平盖管	赛默飞世尔科技	AB-0620	通过 Fisher Scientific
1 mL 注射器	BD	22-253-260	通过 Fisher Scientific
1.5 mL 微量离心管	Fisher Scientific	05-408-129
2.0 mL 冻存管	康宁	430659	通过 Fisher Scientific
27G针头	BD	14-821-13B	通过 Fisher Scientific
台式离心机 5804R	Eppendorf	04-987-372	通过 Fisher Scientific
台式微量离心机	Sorvall	75-003-287	通过 Fisher Scientific
IVIS Lumina XRMS Series III 活体成像系统	珀金埃尔默	CLS136340
磷酸盐缓冲液粉末	Sigma	P3813-10PAK	Sigma-Aldrich