一种用于快速检测Vibrio菌属的新显色培养基

摘要

来源： Yeung, M. 等 一种用于检测的更敏感且特异的显色培养基的开发 副溶血性弧菌 及其他 弧菌 物种。 视频实验杂志 (2016)

本视频展示了一种基于培养的方法，用于鉴定Vibrio物种，重点介绍了显色培养基作为比常用的硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）培养基更准确的替代方案。显色培养基通过检测物种特异性的酶活性，能够更有效地区分Vibrio菌株。

方案

在选择性和鉴别性培养基上的生长

1. 实验前两到四天，将所有微生物菌株划线接种于非选择性培养基（TSAS、BHI 或巧克力琼脂）上以获得单菌落。将平板在 35–37 °C 下孵育 48 小时。孵育后通过观察菌落形态检查培养物的纯度。纯培养物应产生形态一致的菌落。
2. 挑取数个单菌落转移至 5 ml 液体培养基中。在 35–37 °C 下孵育 16–24 小时。

注意：所有实验中用于制备过夜培养物的菌落均应为小于四天的幼龄菌落。

3. 用接种环取一环过夜培养物，在选择性和鉴别性培养基（TCBS 和显色培养基）上划线以分离单菌落。将平板置于 35–37 °C 培养，时间最长不超过 96 小时。
4. 通过观察平板上的菌体密度和分离菌落的大小，记录所有菌株的总体生长情况。在自然光和/或紫外光下记录菌落的颜色。注意记录分离菌落的其他特征，例如隆起度、边缘形态和形状。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂/设备
琼脂	Fisher Scientific	DF0140-15-4	可使用其他品牌
BHI粉末	Fisher Scientific	DF0418-17-7	可使用其他品牌
CampyGen气体发生器	Hardy Diagnostics	CN035A	用于提供微需氧环境；可使用其他品牌
巧克力琼脂平板	Hardy Diagnostics	E14	可使用其他品牌
培养管	Fisher Scientific	S50712	可使用其他品牌
HardyChrom弧菌琼脂平板	Hardy Diagnostics	G319	本研究评估该培养基
培养箱	任意
接种环	Fisher Scientific	22-363-606	本研究使用10微升规格
培养皿	Fisher Scientific	FB0875713	可使用其他品牌
移液器及吸头	任意灭菌吸头
TCBS粉末	Hardy Diagnostics	265020	本研究评估该培养基
TSB粉末	Fisher Scientific	DF0370-07-5	可使用其他品牌
紫外观察柜	任意		发射长波紫外光
水浴锅	任意
细菌种类与菌株
Aeromonas hydrophila	ATCC
Candida albicans	ATCC
Campylobacter jejuni	ATCC
Escherichia coli	ATCC
Proteus mirabilis	ATCC
Pseudomonas aeruginosa	ATCC
Staphylococcus aureus	ATCC
Salmonella Choleraesuis	ATCC
Shigella boydii	ATCC
Shigella flexneri	ATCC
Shigella sonnei	ATCC
Vibrio alginolyticus	ATCC
V. cholerae （血清型包括O139、O1、非O1、El Tor生物型）	FDA, ATCC
V. damsela	FDA
V. fisheri	环境来源
V. fluvialis	CDC
V. furnissii	CDC
V. hollisae	FDA
V. metschnikovii	ATCC
V. mimicus	FDA
V. parahaemolyticus （血清型包括O3:K6、O1:K56、O4:K8、O5:K15、O8等）	ATCC, FDA, CDC, 环境来源
V. proteolyticus	FDA
V. vulnificus	FDA