用于筛选番茄细菌抗性的幼苗淹水试验

摘要

来源： Hassan, J. A., 等 高通量鉴定抗性 Pseudomonas syringae pv. tomato 利用幼苗淹水法在番茄中进行检测。 J. Vis. Exp. (2020).

本视频演示了一种利用接种细菌悬浮液的十日龄幼苗，对不同番茄品系进行细菌抗性筛选的方法。该方法阐释了细菌通过气孔侵入植物，递送效应蛋白以抑制植物免疫反应的过程，以及感病与抗病品系在植物应答上的差异。通过观察植株明显的生长差异来评估实验结果：抗病植株保持健康状态，而感病植株则表现出组织损伤。

方案

1. 番茄幼苗淹水法

1. 将培养10天的幼苗平板从生长室中取出，放入生物安全柜中，准备进行淹水处理。
2. 从两个平板上移除外科胶带。
3. 设置计时器为3分钟。量取6 mL终浓度的P. syringae pv. tomato（Pst）（Pst19 OD₆₀₀ = 0.0075 或 PstDC3000 OD₆₀₀ = 0.005）菌液，将6 mL菌液分别转移至含有10天龄幼苗的平板中。
4. 用无菌移液器吸头轻轻将幼苗压入菌液中。启动计时器。
5. 双手各持一个平板，将平板前端倾斜向下，使菌液聚集并主要浸没幼苗的子叶和叶片。
6. 左右轻轻晃动5–7次，然后将平板向后倾斜，使菌液覆盖根部及整个平板表面。
7. 再次将平板倾斜向下，使子叶和叶片浸入菌液中，重复操作直至满3分钟。
8. 将菌液从平板中倒出，将平板平放于台面上，再次倾倒以去除残留菌液。
9. 用外科胶带重新包裹平板，并对剩余平板重复步骤1.2–1.8。
10. 所有平板完成淹水处理后，将其重新放回生长室中继续培养。

7–10 天后的表型 PstDC3000 或 10–14 天 Pst19.

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
II级A2型生物安全柜
BRAND 一次性塑料比色皿，聚苯乙烯	VWR International	47744-642
Chenille Kraft 平头木制牙签	VWR International	500029-808
玻璃酒精灯灯芯	Fisher Scientific	S41898A / No. W-125
玻璃酒精灯	Fisher Scientific	S41898 / No. BO125
甘油 ACS 级试剂	VWR International	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ 精密擦拭纸	Fisher Scientific	06-666-A
氯化镁，ACS 级	VWR International	97061-356
七水合硫酸镁，ACS 级	VWR International	97062-130
微量离心管，1.5 mL
微量离心管，2.2 mL
Murashige & Skoog 基本盐	Caisson Laboratories, Inc.	MSP01-50LT
Pipet-Lite XLS LTS 8通道移液器 20-200 μL	Rainin	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8通道移液器 2-20 μL	Rainin	L8-20XLS
聚苯乙烯 100 mm × 25 mm 无菌培养皿	VWR International	89107-632
聚苯乙烯 150 mm × 15 mm 无菌培养皿	Fisher Scientific	FB08-757-14
聚苯乙烯 150 mm × 15 mm 无菌培养皿	Fisher Scientific	08-757-148
移液器吸头 LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	Rainin	17005091
移液器吸头 LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	Rainin	17005093