来源：Ayivi, R. et al., 乳酸菌的培养、生长与活性：质量控制视角。J. Vis. Exp. (2022)
本视频演示了从冻存的甘油菌种中复苏受冷应激的乳酸菌、通过厌氧培养恢复细菌活力，以及分离活性菌落用于扩大培养的方法。
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方法文章
乳酸菌的复苏与生长
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2025年9月26日
本文内容
摘要
方案
1. 乳酸菌（LAB）培养物的活化与质量控制方案
- 从-80 °C超低温冰箱中取出已制备好的乳酸菌（LAB）菌株甘油保藏管（置于2 mL离心管中），使用前切勿使其融化。
- 用70%酒精清洁并消毒离心管管口，使用前轻轻涡旋混匀。
- 用移液器将约250 µL（0.25 mL）保藏菌液从离心管转移至新鲜的2 mL MRS（deMan, Rogosa, and Sharpe培养基）试管中。
- 轻轻涡旋混匀，用封口膜密封试管，并在42 °C下厌氧培养过夜12–16小时。
- 从2 mL MRS试管中取约500 µL（0.5 mL）过夜培养物，转移至新鲜的7 mL MRS试管中，涡旋混匀后在42 °C下厌氧培养过夜12–16小时。
- 使用紫外-可见分光光度计在610 nm波长下测定培养物的光密度（OD）或生长情况，并记录OD值在0.7至0.9之间的合格结果。
- 将7 mL MRS试管中的过夜培养物划线接种至MRS和MRCM-PYR（改良强化梭菌培养基-丙酮酸）琼脂平板上，在42 °C下厌氧培养72小时。
- 从琼脂平板上挑取单菌落，转移至新鲜的7 mL MRS试管中，轻轻涡旋混匀，并在42 °C下厌氧培养过夜12–16小时。
- 将含有分离菌株的琼脂平板在4 °C冰箱中保存一周。
- 测定并确认从划线平板分离出的乳酸菌在7 mL MRS试管中培养后的OD值（610 nm波长下，OD值应在0.7至0.9之间），并将这....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 苯胺蓝 | Thermo Scientific | R21526 | 25 g |
| 牛肉浸膏 | Research Products International | 50-197-7509 | 500 g |
| 酵母提取物 | Fisher Scientific | BP1422-500 | 500 g |
| 氯化钙二水合物 | Fisher Scientific | C79-500 | 500 g |
| 无水葡萄糖 | Fisher Scientific | BP350500 | 500 g |
| D-果糖 | ACROS Organics | AC161355000 | 500 g |
| Difco 琼脂粉 | Difco | DF0812-07-1 | 2 kg |
| TPY 琼脂 | Difco | 211921 | 500 g |
| Eppendorf 微量离心管（Snap-Cap Microcentrifuge Safe-Lock） | Fisher Scientific | 05-402-12 | 2 mL |
| 甘油 | Thermo Scientific | PI17904 | 500 mL |
| 红外 CO₂ 培养箱 | Forma Scientific | ||
| Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus | 美国典型培养物保藏中心 (ATCC) | ATCC 11842 | |
| Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus | 保加利亚 | S9 | |
| Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus | 保加利亚 | LB6 | |
| Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus | 北卡罗来纳农业技术州立大学食品微生物学与生物技术实验室 (NCATSU) | DAW | |
| Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus | 北卡罗来纳农业技术州立大学食品微生物学与生物技术实验室 (NCATSU) | E22 | |
| Lactobacillus reuteri | Biogai, Raleigh / 北卡罗来纳农业技术州立大学食品微生物学与生物技术实验室 (NCATSU) | RD2 | |
| 盐酸半胱氨酸一水合物 | Sigma-Aldrich | C6852-25G | 25 g |
| 一水合麦芽糖 | Fisher Scientific | M75-100 | 100 g |
| MRS 肉汤 | Neogen | 50-201-5691 | 5 kg |
| 蛋白胨 No. 3 | Hach | 50-199-6719 | 500 g |
| 磷酸氢二钾 (K₂HPO₄) | Research Products International | 50-712-761 | 500 g |
| 三水合醋酸钠 | Fisher Scientific | S220-1 | 1 kg |
| 氯化钠 | Fisher Scientific | BP358-1 | 1 kg |
| 丙酮酸钠 | Fisher Scientific | BP356-100 | 100 g |
| 带橡胶衬里螺旋盖的试管 | Fisher Scientific | FB70125150 | 25 x 150 mm |
| 吐温 80 | Fisher Scientific | T164-500 | 500 mL |
| 超低温冰箱 | So-Low | ||
| 尿嘧啶 | ACROS Organics | AC157301000 | 100 g |
| 紫外-可见分光光度计 | Thermo Fisher Scientific | Evolution 201 | |
| Vortex Genie 2 涡旋振荡器 | Fisher Scientific | ||
| 酵母提取物 | Fisher Scientific | BP1422-500 | 500 g |
| 乙醇 | Fisher Scientific | T08204K7 | 4 L |
| 盐酸 (6N (认证级), Fisher Chemical) | Fisher Scientific | SA56-500 | 500 mL |
