从革兰氏阳性菌 Bacillus megaterium 制备原生质体

摘要

来源： Figueroa, D. M., et al. 抗菌肽定位表征中细菌球状体与原生质体的制备与可视化。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了从革兰氏阳性菌Bacillus megaterium制备原生质体的逐步操作流程。

方案

1. 溶液配制

1. 在50 mL烧瓶中，将0.015 g溶菌酶溶解于3 mL去离子水（dH₂O）中，配制成5 mg/mL的溶菌酶溶液。使用带有0.2 µm膜的25 mm注射器滤器过滤除菌。将溶液分装至微量离心管中，于-20 °C保存。
2. 在2 L烧瓶中，将30 g胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）溶解于1 L去离子水（dH₂O）中，配制成3% w/v TSB溶液。将溶液分装至若干烧瓶中，每瓶含100 mL TSB，用于后续巨大芽孢杆菌（B. megaterium）原生质体制备。通过高压灭菌对烧瓶进行灭菌处理。灭菌后的TSB可在室温或4 °C保存。
3. 在250 mL烧瓶中，将34.23 g蔗糖（342.3 g/mol）、0.46 g马来酸（116.07 g/mol）和0.38 g MgCl₂（95.21 g/mol）溶解于100 mL去离子水（dH₂O）中，配制溶液C（1 M蔗糖，0.04 M马来酸盐，0.04 M MgCl₂，pH 6.5）。调节pH至6.5。使用带有0.2 µm膜的25 mm注射器滤器过滤除菌，并将溶液储存于锥形管中，室温保存。
4. 在1 L玻璃瓶中，将100 mL 3% w/v TSB与100 mL溶液C混合，配制成200 mL原生质体培养基。高压灭菌以灭菌溶液，室温保存。

2. 革兰氏阳性

结果

图1：代表性图像 B. megaterium. (A) B. megaterium 细菌和（B) B. megaterium 原生质体。图像在100倍放大.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯化镁	Sigma	M8266
蔗糖	Sigma	S7903
溶菌酶	Sigma	L6876
BBL 胰蛋白胨大豆肉汤	Fisher Scientific	B11768
马来酸	Sigma	M0375
Acrodisc 25 mm 注射器滤器，带 0.2 μm HT Tuffryn 膜	Pall Corporation	4192