来源：Bennett, J. A., et al.链霉菌发育突变体的显微观察与评估。J. Vis. Exp. (2018)
本视频展示了野生型和突变型Streptomyces coelicolor菌株的培养及表型比较。视频介绍了减少自发突变、防止交叉污染以及通过正确涂布技术促进细菌生长的操作步骤。最后，通过菌落形态的视觉差异，阐明突变对细菌菌株发育造成的影响。
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方法文章
天蓝色链霉菌野生型与突变株的表型比较
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2025年9月26日
本文内容
摘要
方案
1. 准备仪器、培养基、溶液和培养皿
1. 将牙签放入50 mL烧杯中，用铝箔覆盖后进行高压灭菌，以保持其无菌状态。
2. 在高压灭菌器中对所有将要使用的干燥物品（枪头、玻璃棒、玻璃器皿等）进行灭菌。
注意： 警告！请遵循所使用高压灭菌器型号的所有安全操作说明。高压灭菌器存在爆炸风险，可能导致蒸汽烫伤，以及接触高温表面、材料和培养基而造成伤害。
3. 准备用于培养菌种的MS琼脂（甘露醇大豆粉琼脂（SFM））。
1. 向1 L的烧瓶中加入5 g大豆粉和5 g琼脂。
2. 将5 g甘露醇溶解于250 mL自来水中，加入含有大豆粉和琼脂的烧瓶中。
3. 在烧瓶口添加泡沫塞和铝箔，于121 °C、15 psi条件下高压灭菌至少30分钟。
注意：该培养基极易沸腾溢出。请使用容量至少为实际MS琼脂体积四倍的锥形瓶进行高压灭菌。在安全注意事项相似的情况下，可用标准高压锅代替高压灭菌器。若无法使用高压灭菌器，也可使用微波炉对培养基和材料进行灭菌。高中教师还可考虑与当地高校合作，以获取经高压灭菌的实验用品。
4. 将培养基冷却至可安全操作的温度。注意不要冷却过久，因为琼脂在低于 50 °C 的温度下会凝固。
5. 将 MS 琼脂从烧瓶倒入无菌培养皿中，直至每个培养皿底部约半满（每培养皿约 25 mL 培养基）。待其凝固后方可使用琼脂平板。将琼脂平板置于塑料袋中，室温保存至使用前。
注意：琼脂平板也可保存在冰箱中，特别是当培养基中需要添加抗生素时。
2. 划线 链霉菌属 用于扩增的培养板
1. 使用标准方法（如四区划线法）将Streptomyces菌株在MS琼脂平板上划线至单菌落。
注意：可使用接种环或无菌牙签。可选：Streptomyces 菌种常用其他培养基，如 R2YE 培养基和最低培养基。
2. 在 30 °C 下孵育培养板。
3. 每隔 4–6 天挑取单个菌落重新划线接种平板。随着菌落老化，其发生随机突变的可能性增加。
3. 比较并记录外观特征
1. 在按照步骤2划线接种所有菌株后，观察并记录每种突变株相对于野生型亲本菌株的菌落形态。将新分离的菌株与已深入研究的物种进行比较，例如 S. coelicolor 或 S. venezuelae，当表征新 链霉菌属 物种。注意特征（图1）如基本形态、菌落表面（绒毛状、光滑、皱褶等）、透明度、隆起程度以及色素产生（区分营养菌丝、气生菌丝和/或周围培养基的色素）。
2. 标记一个MS琼脂平板，并以楔形模式划线接种野生型和突变株（图1）。注意各菌株之间不得接触，以防交叉污染。记录菌株接种到平板上的日期和时间。将平板在30 °C条件下培养。
3. 将培养好的培养皿放置在彩色或白色纸张上，以使背景均匀。在纸张上写明菌株名称、日期、培养温度以及首次划线接种后的时间。拍摄培养皿的数码照片，并将上述信息写在作为背景的纸张上，以尽量减少混淆。
注意：如果该照片将用于制备图示，其上的文字可在后续从照片中裁剪掉。
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结果
图1：显示S. coelicolor宏观菌落表型的代表性琼脂平板照片。该琼脂平板展示了野生型S. coelicolor菌株MT1110（WT）气生菌丝的毛状灰白色外观，并与具有不同发育表型的多种随机转座子插入突变体进行对比。突变体或缺...
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 无菌水 | GeneMate | G-3250-1L | |
| 牙签（扁平型） | Target | 081-22-1957 | |
| 移液器吸头（10 mL） | GeneMate | P-1240-10 | |
| 移液器吸头（200 mL） | GeneMate | P-1240-200Y | |
| 移液器吸头（1,250 mL） | GeneMate | P-1240-1250 | |
| 棉签 | Fisherbrand | 23-400-124 | |
| 大豆粉 | Bob's Red Mill | 1516C164 | |
| D-甘露醇 | Sigma-Aldrich | M4125-1KG | |
| 琼脂 | Sigma-Aldrich | A1296-1KG | |
| 100% 甘油 | VWR amresco life science | 0854-1L | |
| 0.8% NaCl（生理盐水） | Sigma-Aldrich | SLBB9000V | |
| 培养皿 | Sigma-Aldrich | P5856-500EA | |
| 盖玻片 #1.5 | Thomas Scientific | 64-0721 | |
| 载玻片 | Carolina | 63-2010 | |
| 高压灭菌器 | Tuttnauer | 2540E | |
| 镊子 | Carolina Biological | 624504 | |
| 本生灯 | Carolina Biological | 706706 | |
| 甲醇 | Sigma-Aldrich | 34860-1L-R | |
| PBS（磷酸盐缓冲液） | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| 100 mL 烧杯 | Pyrex USA | 1000-T | |
| 1 L 烧杯 | Carolina Biological | 721253 |
