巨囊泡内细菌的单细胞培养

Abstract

资料来源： Morita， M. 等人。巨囊泡内单细胞水平的细菌细胞培养。 J. Vis. Exp. （2019）。

该视频演示了一种培养和观察封装在锚定在支撑脂质双层上的巨大囊泡内的单个细菌细胞的方法。该系统能够在有限的、生理相关的微环境中对单细胞生长动力学进行稳定、长期的成像。

Protocol

1. 巨囊泡（GV）观察系统（细菌细胞培养系统）的制备

1. 制备用于构建支撑双层膜的小囊泡 （SV）
   1. 将 20 μL POPC（1-棕榈酰基-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱）溶液和 4 μL 生物素-PEG-DSPE（1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[生物素（聚乙二醇）-2000）溶液倒入玻璃管中。
   2. 通过气流蒸发有机溶剂，形成脂质膜，并将该样品置于干燥器中1小时，以完全蒸发有机溶剂。
   3. 将 200 μL 200 mM 葡萄糖加入 1x LB（Luria-Bertani 肉汤）培养基（GV 的外部水溶液）中到玻璃瓶中。
   4. 用薄膜包裹玻璃瓶的开口部分，并在超声波浴（120 W）中超声处理至少1小时。
   5. 使用微型挤出机和孔径为100 nm的聚碳酸酯膜通过挤出法制备SV。
2. 准备一个手工室
   1. 在双面密封件 （10 mm x 10 mm x 1 mm） 上用空心冲头钻一个 7 mm 的孔。
   2. 将带孔的双面密封粘贴在盖板玻璃（30 mm x 40 mm，厚度 0.25–0.35 mm）上。
3. 在腔室孔中的盖玻片上制备支撑双层膜

Results

图1：GV内细菌细胞培养的观察系统。 （a） GV 通过盖玻片上的生物素-中性亲和素结合固定在支撑膜上。GV 由加热系统孵育。（b） 观察系统的图片，包括一个手工制作的房间。

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Materials