用于筛选 秀丽隐杆线虫 敲低的多孔液体测定

Abstract

资料来源： Anderson， Q. L. et al. 一种高通量、高含量、液体基 秀丽隐杆线虫 病理学系统。 J. Vis. Exp. （2018年）

该视频演示了一种使用 秀丽隐杆线虫 的高通量筛选方法来研究宿主-病原体相互作用期间的基因敲低。它概述了制备敲低蠕虫并将其转移到测定板以评估病原体诱导的蠕虫杀灭效果的程序。

Protocol

1. 适应筛选多种秀丽隐杆线虫菌株或敲低（核糖核酸干扰 （RNAi） 筛选设置）

注意： 这是针对 24 孔板设置描述的 RNAi 筛选。

1. 在含有接种有 RNAi 的蠕虫的 24 孔板的每孔中加入 1 mL S 基础。通过摇动板轻轻搅拌蠕虫，然后将蠕虫转移到空的无菌 24 深孔板中。让蠕虫在重力作用下沉降（~5 分钟）。
2. 吸出上清液，留下约 1 mL。向每个孔中加入 7 mL S 基础。
3. 重复步骤 1.1 - 1.2 至少 2 次。最终洗涤后，吸出上清液，留下约 400 μL。
4. 使用蠕虫分选机的重采样器功能，将 22 条蠕虫从 24 孔板蠕虫悬浮液中分选到 384 孔板的每个孔中（24 孔板的每个孔产生 8 - 12 孔的 384 孔板）。
   1. 为避免饥饿，在分选前将细菌移液到 384 孔板中（仅用作食物的菌株，例如 OP50 或致病菌株）。
5. 将蠕虫分拣到384孔板中后，加入小分子或其他实验特异性材料。

Materials