利用添加氧化还原染料的半固体培养基观察细菌运动性

摘要

来源：Chu, W., and Zhuang, X. 基于显色反应的细菌运动性可视化. J. Vis. Exp. (2022)

本视频展示了一种基于氧化还原染料的半固体琼脂检测方法，通过肉眼区分运动型和非运动型菌株来评估细菌的运动能力。

方案

细菌菌株

注意：从水生环境中分离出80株菌株，并使用自动化细菌鉴定仪器（参见材料表）进行鉴定，包括大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、沙门氏菌属（Salmonella spp.）、弧菌属（Vibrio spp.）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）（表1）。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）（参见材料表）用作非运动性阴性对照；大肠杆菌（Escherichia coli）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）（参见材料表）用作阳性对照菌株。

1. 确定用于运动性分析的测试菌株。
2. 包括非运动性的阴性对照菌株和运动性的阳性对照菌株。

增强型TTC细菌运动性观察

1. 用接种针挑取琼脂平板上的单菌落，穿刺接种于含TTC（2,3,5-三苯基四氮唑氯化物）的半固体培养基中。
2. 将试管置于37 °C培养箱中培养24–48小时，观察结果。
3. 观察生长状态：若仅穿刺线呈红色，则判定该细菌为非运动性（-）；若红色轻微沿穿刺线向外扩散，则判定该细菌为运动性（+）。

表1：细菌运动性的比较。

菌株		含0.4%琼脂的半固体培养基		含0.4%琼脂和0.005%TTC的半固体培养基
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
数字表示阳性菌株（+）和阴性菌株（-）的数量。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
细菌琼脂	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	阳性对照
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	阳性对照
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	阴性非运动性对照
胰蛋白胨	OXOID
TTC（2,3,5-三苯基氯化四氮唑）	Sigma	298-96-4
VITEK 2 自动微生物鉴定系统	Bio Mérieux