细菌孢子萌发过程中皮质降解的比色检测

摘要

资料来源： Francis， M. B. 等人。检测细菌孢子萌发过程中的皮质片段。 J. Vis. Exp. （2016）。

该视频演示了一种比色法，通过测量还原糖随时间的释放来检测细菌孢子萌发过程中皮层降解。该测定使用 N-乙酰氨基葡萄糖标准品和时间点样品，通过紫色显色反应量化糖浓度，指示皮质水解的程度。

方案

1. 彩色试剂

1. 当样品在冰上时，准备颜色试剂。溶解0.320 g对二甲氨基苯甲醛（DMAB;埃利希试剂）在 1.9 ml 冰醋酸中。
   注意： 试剂对时间、温度和光敏感，不应提前制作。
2. DMAB完全溶解后，加入100μl10N HCl并涡旋。
3. 加入5毫升冰醋酸和涡旋。

2. 比色反应

1. 将 100 μl 每个冷却的皮层样品转移到新的 1.5 ml 微量离心管中。
2. 向每个样品中加入 700 μl 新鲜制备的色溶液。
3. 立即将样品转移到 37 °C 水浴中并孵育 20 分钟。
4. 将每个样品的 200 μl 转移到透明的 96 孔板中。
5. 在酶标仪上以 585 nm 处定量样品。样品应从黄色开始，阳性反应将转变为紫色。存在的皮层越多，紫色越深。

材料