厌氧条件下检测生物可利用汞的细菌生物传感器实验

摘要

来源：Stenzler, B. R. et. al., 一种用于检测汞和镉的厌氧生物传感器检测方法。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了利用基因工程改造的细菌生物传感器，在厌氧条件下精确测量汞离子生物可利用部分的方法。通过调节硫酸镁的浓度，该检测方法确保生物传感器仅对游离汞离子产生响应，响应结果通过荧光强度的变化进行指示。

方案

1. 暴露实验

1. 设计板式布局。
   注意：在开始暴露实验之前，务必完成所有移液量的计算并准备好相应的储备液。如何正确设计实验以及应包含哪些对照组，文中已详细说明。此外，若厌氧监测仪显示厌氧舱内存在氧气，则不应启动实验。
2. 根据96孔模板设计板式布局。该布局可支持32种不同处理条件，每种条件进行3次技术重复，最适宜采用4 × 8网格形式来设置小管（见图1）。

注意： 在检测某一变量对汞（Hg）吸收作用时，采用以下方法 汞诱导型生物传感器 每个变量都需要两种处理： 治疗 （生物传感器 + 汞（Hg）+ 变量 + 硝酸盐）及其 处理空白 （生物传感器 + 变量 + 硝酸盐）。在利用生物传感器研究某一变量对细胞生理功能的影响时 组成型生物传感器， 每个变量需要两个处理： 治疗 （生物传感器 + Hg + 可变 + 硝酸盐）以及 治疗 空白 （生物传感器 + 变量 + Hg）。汞可替换为镉（Cd）。在....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
7 ml 标准小瓶，内壁圆润	Delta Scientific	200-007-20	推荐使用 34 个
小瓶托盘，21 mm 孔径	Delta Scientific	730-2001	4 个（4 × 8 网格）
24 mm 瓶盖	Delta Scientific	600-024-01	推荐使用 32 个
Corning 96 孔透明平底非结合表面微孔板	Corning	Corning 3651
厌氧培养箱（手套箱）			厌氧培养箱内的气体环境应为（97 % 氮气 ± 2 % 和 3 % 氢气 ± 2 %）
微孔板读数仪
微孔板读数仪用 450 (±10) nM 滤光片
微孔板读数仪用 500 (±10) nM 滤光片