单细胞细菌相互作用的可视化

摘要

资料来源： Yarringto， K. D. 等人。 单细胞种间细菌相互作用的动力学可视化。 J. Vis. Exp. （2020年）

该视频演示了如何在琼脂糖垫下使用运动和非运动细菌制备共培养系统，以进行活细胞成像。它展示了运动细菌如何检测化学引诱剂并侵入非运动菌落，揭示细菌相互作用。

方案

1. 细菌细胞和接种垫的制备

1. 测量每个传代培养物的光密度OD₆₀₀，并将 铜绿假单胞菌 稀释至OD₆₀₀ = 0.03，将 金黄色葡萄球菌 稀释至OD₆₀₀ = 0.10，在预热至37°C的M8T（最小培养基8 +胰蛋白胨）中稀释至OD 600 = 0.10。以1：1的比例混合铜 绿假单 胞菌和 金黄色葡萄球 菌并涡旋。
   注意： 如果菌株需要抗生素，可以将它们添加到过夜和传代培养中，但如果它们影响共培养中的其他物种，则在混合物种进行成像时不应添加它们。需要确定质粒稳定性和抗生素对共培养中所有物种的影响，以确定所使用的每种生物体/质粒。
2. 将 1 μL 共培养物均匀地移液到预热的无菌 35 mm 玻璃盖玻片培养皿的底部。
3. 使用无菌镊子从模具中取出硅胶切口。
4. 使用无菌抹刀从盘子上取下垫子。
   1. 将略微弯曲的抹刀滑入垫子边缘下方，同时将模具倒置，将其放到无菌培养皿盖上。
      注意： 不要强行将垫子拉出，否则它会撕裂。跟踪垫子的哪一侧是底部。
5. 通过将 90° 角抹刀滑到垫下方并将其放在接种盖玻片的顶部，将垫子底部朝下转移到装有细菌细胞的培养皿上。使用 90° 角抹刀使垫子与盖玻片齐平，并轻轻压出任何气泡。
6. 去除湿湿巾上多余的水分，并将它们放在盘子边缘，确保它们不会接触垫子。样品现在已准备好进行成像。

材料