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1. 通过 Triton X-114 (TX-114) 相分离法富集脂蛋白
- 向细菌裂解液中加入TX-114表面活性剂，通过加入等体积的4%（vol/vol）表面活性剂冰冻Tris缓冲盐水/乙二胺四乙酸（TBSE）溶液，使终浓度达到2%（vol/vol），在冰上孵育1小时，每约15分钟轻轻颠倒混匀一次。
注意：冷却后，上清液与表面活性剂可混溶。 - 将离心管转移至37 °C水浴中孵育10分钟以诱导相分离。在室温下以10,000 × g离心10分钟，以维持双相分离状态。
- 小心用移液器吸除上层水相并弃去。向下层表面活性剂相中加入冰冻TBSE，补足至原始体积，轻轻颠倒混匀。在冰上孵育10分钟。
- 将离心管转移至37 °C水浴中孵育10分钟以再次诱导相分离，随后在室温下以10,000 × g离心10分钟。
- 重复步骤1.3–1.4一次，共完成3次相分离。吸除上层水相并弃去。
- 向表面活性剂相中加入1体积冰冻TBSE，以去除提取过程中形成的沉淀蛋白（可见于管底）。在4 °C下以16,000 × g离心2分钟，使不溶性蛋白形成沉淀。
注意：样品应保持单相状态。若发生相分离，需重新冰浴并再次离心。该沉淀通常由非脂蛋白污染物组成，但也可保留用于进一步分析。 - 立即将上清液转移至含有1250 μL 100%丙酮的新鲜2.0 mL微量离心管中。充分上下吹打，彻底清洗移液器吸头，因样品可能较黏稠。轻轻颠倒混匀，并在-20 °C过夜孵育，以沉淀脂蛋白。
- 在室温下以16,000 × g离心20分钟，使脂蛋白形成沉淀，注意离心管的放置方向。脂蛋白将在管壁外侧形成一层薄而白色的膜状物。
- 用100%丙酮洗涤沉淀两次。倾去丙酮，让样品自然风干。
- 加入20–40 μL 10 mM Tris-盐酸缓冲液（pH 8.0）或标准Laemmli SDS-PAGE上样缓冲液，通过在管壁反复上下吹打，充分重悬沉淀的脂蛋白。用移液器吸头轻轻刮擦管壁，以使脂蛋白脱离。
注意：脂蛋白不会溶解于Tris缓冲液中，而是形成悬浮液。- 将脂蛋白储存于-20 °C，待用。