通过快速平衡透析法测定药物与结核病病灶中干酪样坏死物的结合

摘要

来源： Sarathy, J. P. 等 一个 体外 预测药物在结核病病灶中渗透性的酪蛋白结合测定法 视频实验杂志 (2017)

本视频演示了一种利用快速平衡透析法体外测定药物与结核病病灶中干酪样坏死物结合的实验方法。该方法概述了制备干酪样坏死物悬浮液、进行透析以及计算游离药物分数的步骤，以预测药物向干酪样坏死物中的渗透情况。

方案

1. 快速平衡透析（RED）实验

1. 取6.5 µL的500 µM受试化合物溶液，加入643.5 µL匀浆液中，使终浓度达到5 µM（≤1% DMSO），涡旋混匀。
2. 将RED小室放入底板中。在每个RED小室的供体室（红色环）中加入200 µL含药基质，在每个接收室中加入350 µL磷酸盐缓冲液（PBS）。每种受试化合物准备3个小室（设三个重复样本）。用粘性板封膜密封板，于37 °C、200 rpm（1 × g）条件下在恒温混匀仪中孵育4小时。
3. 孵育结束后，通过上下吹打2–3次轻轻混匀供体室和接收室中的内容物。从供体室中吸取20 µL匀浆液，转移至1.5 mL离心管中的20 µL新鲜PBS中（1:1稀释）。同样，从接收室中吸取20 µL PBS样品，加入20 µL新鲜匀浆液中（基质匹配）。
   注意：基质匹配可避免在定量分析时需分别建立匀浆液和PBS中的两条校准曲线。供体室内容物可能随时间发生沉淀，取样前应通过移液操作轻轻混匀。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
可重复使用 Pierce RED 装置底板	菲舍尔科技	PI-89811
Pierce RED 装置插入件，50 个/盒	菲舍尔科技	PI-89809
Pierce RED 插入件移除工具	菲舍尔科技	89812
粘性板封膜	菲舍尔科技	08-408-240
PBS，pH 7.4，10×500 mL（Gibco）	生命技术公司	10010-049
DMSO	西格玛	472301