鼠伤寒沙门氏菌 培养物的制备

摘要

来源：Gutiérrez, S., et. al., 从巨噬细胞中分离含鼠伤寒沙门氏菌的吞噬体。J. Vis. Exp. (2017)

本视频演示了细胞的培养与制备 Salmonella typhimurium 获得适合实验使用的纯净且具有代谢活性的细菌悬液。

方案

所有涉及使用致病性Salmonella typhimurium的步骤必须在生物安全二级（BSL-2）或更高级别的生物安全设施中进行。

1. 培养伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）

1. 接种 沙门氏菌 typhimurium 使用细菌接种环将SL1344菌株的单个细菌菌落接种至5 mL脑心浸液（BHI）肉汤中。
2. 在37 °C摇床培养箱中孵育细菌悬液过夜。
3. 次日，将1 mL细菌悬液转移至含有19 mL BHI肉汤的锥形瓶中，在37 °C摇床培养箱中孵育。
4. 监测 S. 伤寒沙门菌 通过测量600 nm处的光密度（OD）来评估生长情况（OD₆₀₀使用分光光度计进行测量，每约30分钟测量一次。
5. 当OD₆₀₀ 当达到1.0时，从培养箱中取出细菌悬液，转移至50 mL离心管中。在4 °C条件下，以5,400 x g离心15分钟。
6. 移除上清液，并用10 mL无菌磷酸盐缓冲液（PBS）重悬。
7. 在 4 °C 条件下以 5,400 x g 离心 15 分钟。
8. 移除上清液，并将细菌重悬于 4.9 mL 无菌 PBS 中。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MgCl₂	Carl Roth	A537.4
蔗糖	Carl Roth	4621.1
甘露醇	Carl Roth	4175.1
SmartSpec 3000 分光光度计	Bio-Rad	170-2501
细菌接种环（10µl）	Sarstedt	86.1562.010
Salmonella enterica 血清型 Typhimurium SL1344	Leibniz研究所DSMZ-德国微生物和细胞培养物保藏中心
PBS（磷酸盐缓冲液）	Biochrom	L1825