制备人工痰液培养基以在体外模拟囊性纤维化肺部痰液

摘要

来源：Vieira, J.，等。用于研究补充氧气对囊性纤维化气道微生物组影响的模型设计与开发。J. Vis. Exp.（2021）。

本视频展示了制备一种人工痰液培养基的过程，该培养基可模拟囊性纤维化患者肺部痰液的黏度、营养成分和pH值。所得到的培养基为离体研究提供了具有生理相关性的实验平台。

方案

1. 人工痰液培养基的制备

注意：此处列出的数量适用于制备 1 L 最终人工痰液培养基，并假设使用材料表中列出的特定试剂。若制备其他体积或使用不同试剂，必须相应调整数值，以确保获得相同的最终产物。目标浓度详见表 1。

1. 人工痰液化学混合物（ASCM）
   注意： ASCM 占最终培养基体积的 25%。该混合物可长期保存，可批量或提前制备。若需后续使用，请对化学混合物进行高压灭菌，并在室温下安全储存。
   1. 混合各组分化学储备液。
      1. 制备 1 M NaCl 储备液：每升无菌水中加入 58.44 g NaCl。
      2. 制备 1 M KCl 储备液：每升无菌水中加入 74.55 g KCl。
      3. 制备 1 M MgSO₄ 储备液：每升无菌水中加入 246.47 g MgSO₄·7H₂O，或 120.37 g 无水 MgSO₄。
      4. 制备 1 M 葡萄糖储备液：每升无菌水中加入 180.16 g 葡萄糖。
   2. 对化学储备液以及一个空的 250 mL 瓶子进行高压灭菌。高压灭菌....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
BME 维生素 (100x) 溶液	MilliporeSigma	B6891	补充维生素的浓缩溶液。
压盖机，30 mm	DWK Life Sciences	224307	用于将铝盖压接至血清瓶的压盖工具。
D-(+)-葡萄糖	MilliporeSigma	G7021	固体葡萄糖粉末（右旋异构体）。
隔膜泵 ME 2 NT	VACUUBRAND	20730003	用于真空过滤的真空泵。
蛋黄乳液	HiMedia	FD045	30% 蛋黄在生理盐水中的无菌乳液。
阳离子化铁蛋白（源自马脾）	MilliporeSigma	F7879	铁蛋白（储铁蛋白）溶液。
FIREBOY plus 安全本生灯	Integra Biosciences	144000	带用户界面和安全功能的本生灯。
Hydrion pH 试纸 (1.0–14.0)	Micro Essential Laboratory	94	用于检测 pH 1.0–14.0 范围的试纸。
Hydrion pH 试纸 (4.0–9.0)	Micro Essential Laboratory	55	用于检测 pH 4.0–9.0 范围的试纸。
Hydrion pH 试纸 (6.0–8.0)	Micro Essential Laboratory	345	用于检测 pH 6.0–8.0 范围的试纸。
Pro EDGE 安全型皮下注射针头，18 G	Smiths Medical	401815	带安全帽的 18 G 针头。
管路压力表	MilliporeSigma	20469	用于监测瓶内气体压力的压力表。
Innova 42 恒温摇床	Eppendorf	2231000756	恒温培养与轨道摇床组合装置。
带针头的鲁尔锁式注射器	Becton Dickinson	309580	3 mL 注射器与 18 G 针头组合。
鲁尔阀套装	World Precision Instruments	14011	用于气体管路的阀门。
LSE 轨道摇床	ThermoFisher Scientific	6780-NP	过滤过程中用于振荡培养基的轨道摇床。
七水合硫酸镁	MilliporeSigma	M2773	固体泻盐（七水合硫酸镁）。
医用空气单级调压阀带流量计	Western Enterprises	M1-346-15FM	带 15 L/min 流量计的空气流速调节器。
MEM 氨基酸 (50x) 溶液	MilliporeSigma	M5550	必需氨基酸的浓缩溶液。
MEM 非必需氨基酸 (100x) 溶液	MilliporeSigma	M7145	非必需氨基酸的浓缩溶液。
Millex-GP 滤器，0.22 µm	MilliporeSigma	SLMP25SS	0.22 µm 聚醚砜膜无菌注射式滤器。
Milli-Q Academic	MilliporeSigma	ZMQS60E01	Milli-Q 无菌水纯化系统。
MiniOX 3000 氧气监测仪	MSA	814365	气体流中氧气浓度百分比监测仪。
MOPS 缓冲液 (1 M, pH 9.0)	Boston BioProducts	BBM-90	用于调节培养基 pH 的 MOPS 缓冲液。
猪胃黏蛋白	MilliporeSigma	M2378	黏蛋白（糖基化凝胶形成蛋白）粉末。
氯化钾	MilliporeSigma	P9541	固体氯化钾盐。
PTFE 一次性搅拌子	ThermoFisher Scientific	14-513-95	一次性磁力搅拌子。
PTFE 螺纹密封聚四氟乙烯胶带	VWR	470042-938	用于加固气体系统连接处的聚四氟乙烯胶带。
Q-Gard 2 纯化滤芯	MilliporeSigma	QGARD00D2	用于 Milli-Q 系统的纯化滤芯。
可重复使用培养基储存瓶	ThermoFisher Scientific	06-423A	用于配制和储存培养基的瓶子。
橡胶塞，30 mm，灰色溴丁基	DWK Life Sciences	224100-331	用于血清瓶的橡胶塞。
带模制刻度的血清瓶，500 mL	DWK Life Sciences	223952	用于密闭培养的玻璃血清瓶。
细管径延长管套装	Braun Medical	471960	带鲁尔锁接头的延长管。
氯化钠	MilliporeSigma	S3014	固体氯化钠盐。
微量元素混合液，1000x	ThermoFisher Scientific	NC0112668	生理浓度微量元素的浓缩溶液。
无衬铝盖，30 mm	DWK Life Sciences	224187-01	压接在橡胶塞顶部的铝盖。