利用植物根系分泌物处理细菌以模拟体外植物-微生物相互作用

摘要

来源：Yi, Y., 等. 植物-微生物互作：芽孢杆菌属菌株Bacillus mycoides对马铃薯根系分泌物的转录响应。J. Vis. Exp. (2018)

本视频演示了为研究植物-微生物相互作用而进行的芽孢杆菌（Bacillus mycoides）培养物的制备与处理过程。内容涵盖了从划线接种保藏菌种、液体培养基中培养，到在振荡条件下使细菌暴露于植物根系分泌物的各个步骤。整个流程最终通过收集并快速冷冻细菌细胞，以用于后续分析分泌物诱导的基因表达变化。

方案

1. 培养细菌

1. 从 -80 °C 甘油保藏菌种中挑取一环 B. mycoides 菌株，在 Luria-Bertani (LB) 琼脂平板上划线接种，并于 30 °C 培养过夜。

2. 从平板上挑取单个菌落接种于LB液体培养基中，置于摇床培养箱中，200 rpm振荡过夜培养
30 °C

2. 细菌的处理与取样

1. 为了将经根系分泌物处理的细菌的生长曲线与阴性对照进行比较，准备一系列含有50 mL LB液体培养基的锥形瓶。向所有锥形瓶中加入0.5 mL过夜培养的细菌菌液，并分别向培养基中添加0%、5%、10%或15%（v/v）的根系分泌物或无菌去离子水。

2. 使用去离子水代替根系分泌物的培养物作为对照。此后每1小时测定一次600 nm处的光密度（OD₆₀₀）。通过绘制OD₆₀₀值随时间变化的曲线，生成生长曲线。

3. 将过夜培养的 B. mycoides 菌液用90 mL预热的LB培养基稀释，使300 mL三角瓶中的初始OD₆₀₀约为0.05。向菌液中加入10 mL根系分泌物，于30 °C培养1小时。

4. 使用10 mL无菌去离子水处理作为对照。在4 °C条件下，以9,000 × g离心2分钟收集培养物中的细胞。弃去上清液，立即将沉淀物在液氮中速冻，然后于-80 °C保存备用。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
次氯酸钠	Sigma	CAS: 7681-52-9	10-15% 活性氯
LB（Luria-Bertani）液体培养基
培养箱	New Brunswick Scientific	Innova 4000
分光光度计	Thermo Fisher Scientific	Genesys 20
液氮
玻璃珠	Sigma	G8893	0.5 µm
带螺口盖的 2.0 ml 离心管			RNase free
1.5 ml 和 2.0 ml 离心管			RNase free
离心机	Eppendorf	5430