培养非分型流感嗜血杆菌Haemophilus influenzae

摘要

来源： Venuprasad, K. 等人， 经气管给药 流感嗜血杆菌 在小鼠模型中研究气道炎症。 视频实验杂志 (2016)

本视频展示了不可分型流感嗜血杆菌的培养方法 流感嗜血杆菌 以及为后续定植或感染研究制备剂量标准化的接种物。

方案

1. 非分型流感嗜血杆菌 Haemophilus influenzae （NTHi）的培养及接种物制备

1. 将NTHi接种于巧克力琼脂平板上，倒置平板并置于湿润的CO₂培养箱中培养₂ 37 °C、5% CO₂ 培养箱中孵育过夜₂次日，将细菌接种于脑心浸出液肉汤中培养。然后，取1 ml肉汤加入无菌的1.5 ml离心管中。
2. 在室温下以 4,000 x g 离心 5 分钟。弃去上清液，将沉淀重悬于 1 ml 无菌 1x 磷酸盐缓冲液（PBS）中。重复此步骤一次。
3. 将100 µl重悬液转移至900 µl的1x PBS中，在分光光度计中测定稀释菌液在600 nm波长处的吸光度。
4. 通过在巧克力琼脂平板上培养1:10系列稀释的接种物，并于37 °C、5% CO₂条件下过夜培养，测定接种物的活力及菌落形成单位（CFUs）。₂.
5. 根据上一步确定的活菌数和菌落形成单位（CFUs），将接种物调整至终浓度为 20 x 10⁶ CFU/ml

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
巧克力琼脂平板	费舍尔科技	CAS50-99-7
1.5 ml 微量离心管	Light Labs	A-7001-R
1X PBS	吉布科	10010-023