从小鼠模型中采集感染非分型流感嗜血杆菌后的支气管肺泡灌洗液 流感嗜血杆菌

摘要

来源： Venuprasad, K., 等 经气管给药 流感嗜血杆菌 在小鼠模型中研究气道炎症。 视频实验杂志 (2016)

本视频展示了从感染了无荚膜型细菌的安乐死小鼠中收集和处理支气管肺泡灌洗液的过程 流感嗜血杆菌 用于下游分析。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 支气管肺泡灌洗液（BALF）的采集
   1. 感染后24小时，通过颈椎脱位法处死小鼠。
   2. 使用解剖剪打开小鼠腹腔，剪断腹主动脉放血，并暴露肺的腹侧面。
   3. 暴露气管后，插入20号导管进行插管。注入0.8 ml BALF缓冲液（1×PBS（磷酸盐缓冲盐水）、0.1%葡萄糖、10 U/ml肝素），通过轻柔抽吸回收灌洗液。重复该操作三次。
   4. 使用血细胞计数板在10倍显微镜下结合台盼蓝染色，对100 µl BALF悬液中的细胞进行总细胞计数。
   5. 制备改良吉姆萨染色用载玻片。取100 µl BALF加入细胞离心涂片机的相应孔中，在500 × g下离心5分钟。室温干燥10分钟，然后根据试剂生产商的操作说明对细胞进行改良吉姆萨染色。
   6. 剩余细胞可用于后续分析，如荧光激活细胞分选（FACS）、共聚焦显微镜、基因表达分析和蛋白质印迹（Western blot）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
无水葡萄糖	Themo Scientific	R01300
肝素	Hospira,Inc	RL-3010
注射器针头 20/26G	BD	(REF305115/175)
1 ml 注射器	BD	REF 309602
导管 20GA	BD	REF 381433
不锈钢镊子 #5，长11cm	kentscientific	INS600095
5ml 聚苯乙烯圆底管	BD	REF 352058
1.5 ml 微量离心管	Light Labs	A-7001-R
1X PBS（磷酸盐缓冲液）	Gibco	10010-023
RBC裂解缓冲液（10X）	Biolegend	420301