密度梯度法纯化蓝细菌类囊体球状体

摘要

来源：Shivaiah, K., et al. 从植物叶片组织和蓝细菌中分离质体小球脂滴。J. Vis. Exp. (2022)。

本视频展示了利用蔗糖密度梯度离心法从蓝细菌中分离质体小球，突出其富含脂质、密度较低的特性，并确保其结构在后续分析中得以完整保存。

方案

1. 纯化质体小球的提取

1. 蓝藻处理
   1. 在四个2.5 mL超速离心管中制备蔗糖梯度，首先加入500 µL步骤1.3获得的粗制质体小球，并与750 µL中等浓度R 0.7混合，然后覆盖750 µL的R 0.2低浓度介质 (表1)
   2. 在4 °C条件下，以150,000 × g 离心90分钟。使用注射器和22 G针头从蔗糖梯度的上层相收集纯化的质体小球 (图1C)，并转移至1.5 mL离心管中。
   3. 将纯化的质体小球分装后，用液氮速冻。可直接于−80 °C保存，或冻干成干粉储存。

表1：蓝细菌质体小球分离用缓冲液配方。

R 培养基	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
R 培养基 0.2	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
	0.2 M 蔗糖
R 培养基 0.7	50 mM HEPES-KOH (pH 8.0)
	5 mM MgCl2
	0.7 M 蔗糖

结果

图1：质体小球和类囊体的分离及免疫印迹分析。（A）来自Z. mays的代表性纯化质体小球样品，在从蔗糖梯度中提取之前的形态。（B）来自干燥处理的E. nindensis的代表性粗提质体小球样品，在从蔗糖垫层中提取之前的形态。（C

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
HEPES	Sigma Aldrich	H3375
氯化镁	Sigma Aldrich	M8266
蔗糖	Sigma Aldrich	S9378
Synechocystis sp. PCC 6803	不适用	不适用
Optima MAX-TL 超速离心机	Beckman Coulter	A95761