评估无菌 C. elegans 中的肠道细菌定植

摘要

来源： Taylor, M. N., 等。 利用单条线虫数据量化异质性 秀丽隐杆线虫- 细菌相互作用 视频实验杂志 (2022)

本视频展示了将无菌且年龄匹配的Caenorhabditis elegans线虫暴露于一种细菌菌株以实现肠道定植的过程。视频详细说明了如何选择性去除未黏附及外部的细菌，仅保留黏附在肠道上皮上的可存活细菌，以便进行定量分析。

方案

1. 在液体培养基中用活细菌喂养线虫

注意：本方案用于在液体培养条件下，使线虫与实验室培养的细菌在充分混匀的环境中定植。线虫可定植单一纯培养分离菌（例如，Enterococcus faecium等病原菌），也可定植多种分离菌的混合物（例如，简化微生物组群落）。

1. 从15 mL锥形管中含蔗糖洗涤的同步化成虫开始，用12 mL S缓冲液洗涤虫体一次，弃去上清液。
2. 将洗涤后的线虫重悬于实验所需体积的S培养基中。需考虑实验条件的体积、线虫将被分配到的条件数量，以及线虫和细菌的最终浓度。
   注意： 线虫的摄食行为随细菌的可获得性而变化，且高密度饲养可使其产生应激。对于液体培养中的定植实验， <1000 条蠕虫/毫升以及 >10⁷ 建议使用 CFU/mL；10¹¹ CFU/mL 被认为是“随意摄取饲养密度对 E. coli.
3. 离心细菌培养物。倒去上清液；对于形成松散沉淀的细菌，可使用抽吸或移液方式去除上清液。
   注意： 用于培养 >5 mL，转移至15 mL离心管中，以约2800 x g 在大型台式离心机中离心8–10分钟。培养物 <5 mL 可转移至 1.5 mL 离心管中，在 9000 x g 条件下离心 g 在小型台式离心机中离心1-2分钟。高度运动性的....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
漂白剂，商用，8.25% 次氯酸钠	Clorox
二水合氯化钙	Fisher Scientific	AC423525000
胆固醇	VWR	AAA11470-30
一水合柠檬酸	Fisher Scientific	AC124910010
五水合硫酸铜(II)	Fisher Scientific	AC197722500
Corning 6765 LSE 小型微量离心机	Corning	COR-6765
Eppendorf 1.5 mL 微量离心管，自然色	Eppendorf
Eppendorf 5424R 微量离心机	Eppendorf	5406000640	24 孔制冷台式微量离心机
Eppendorf 5810R 离心机，配 S-4-104 转子	Eppendorf	22627040	3L 台式离心机，配有适用于 15–50 mL 管和板的适配器
Eppendorf 板桶（x2），用于转子 S-4-104	Eppendorf	22638930
乙醇 100%	Fisher Scientific	BP2818500
七水合硫酸亚铁(II)	Fisher Scientific	423731000
七水合硫酸镁	Fisher Scientific	AC124900010
四水合氯化锰(II)	VWR	470301-706
蛋白胨	Fisher Scientific	BP1420-500
磷酸盐缓冲液 (1X PBS)	Gold Bio	P-271-200
聚丙烯自动灭菌托盘，浅型	Fisher Scientific	13-361-10
氢氧化钾	Fisher Scientific	AC134062500
磷酸氢二钾	Fisher Scientific	BP363-1
磷酸二氢钾	Fisher Scientific	BP362-1
勺型金属实验室刮勺	VWR	470149-438
氢氧化钠	VWR	BDH7247-1
无水磷酸氢二钠	Fisher Scientific	BP332-500
氯化钠	Fisher Scientific	BP358-1
一水合三柠檬酸三钾	Fisher Scientific	AC611755000
吐温 X-100	Fisher Scientific	BP151-100
七水合硫酸锌	Fisher Scientific	AC205982500