制备 嗜肺军团菌 用于冷冻电子断层扫描

摘要

来源： Chetrit, D., 等结合活细胞成像与冷冻电子断层扫描技术解析细胞时空特征 嗜肺军团菌 Dot/Icm 分泌系统 视觉实验杂志. (2020)

该视频介绍了通过结合细菌培养、金纳米颗粒标记和玻璃化冷冻技术，制备嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）样品用于冷冻电子断层扫描的方法。该过程可保持细胞天然结构，并实现对膜相关分泌系统组分的高分辨率成像。

方案

1. 利用冷冻电子断层扫描技术检测sfGFP的质量密度

1. 样品制备、数据采集与重构

1. 在 CYE-琼脂-链霉素平板上于 37 °C 培养 48 小时，培养表达荧光标记 Dot/Icm 蛋白的大量 Legionella pneumophila。用 ddH₂O 重悬菌体，使 OD₆₀₀ 达到 0.7。向 20 µL 菌悬液中加入 5 µL 胶体金颗粒（BSA 示踪剂，10 nm）。

2. 用移液器将5 μL细胞混合液滴加到新鲜辉光放电处理的有孔碳支持膜载网（R 2/1，铜质，200目）上，静置1分钟。用滤纸吸去多余液体，然后使用重力驱动的压模装置在液态乙烷中快速冷冻。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
10 nm 胶体金颗粒	Aurion	25486
100x Plan Apo 物镜（1.4 NA）	Nikon
ACES	Sigma-Aldrich	A9758
CoolSNAP EZ 20 MHz 数字黑白相机	Photometrics
Gene Frame，1.7x2.8 cm，125 µL	Fisher Scientific	AB-0578
带孔碳支持膜 R 2/1 Cu 200 目	Quantifoil	Q225-CR1
硝酸铁九水合物	Sigma-Aldrich	216828
K2 Summit 冷冻电镜相机	GATAN
显微镜盖玻片 22x22 mm	Fisher Scientific	12-542B
显微镜盖玻片 24x50 mm	Fisher Scientific	12-545K
显微镜载玻片 25x75x1 mm	Globe Scientific	1380
SlideBook 6.0	Intelligent Imaging Innovations
Spectra X 光源系统	Lumencor