培养快速生长的细菌 Vibrio natriegens

摘要

来源：Wiegand, D. J., Lee, 等, 利用快速生长的细菌Vibrio natriegens进行无细胞蛋白表达。 J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了在通气条件下培养和收获快速生长的细菌——Vibrio natriegens，以制备用于粗提物生成的菌体沉淀。

方案

制备Vibrio natriegens 粗细胞提取物——细菌培养

1. 准备 V. natriegens 细菌培养基 LB-V2（含 V2 盐的溶菌肉汤） 表1. 使用高压灭菌法对培养基进行灭菌。待培养基冷却至室温（RT）。将多余的培养基在室温（RT）下储存。
   警告： 穿戴适当的个人防护装备（PPE），操作高压灭菌器时应查阅实验室特定的操作规程。
2. 使用野生型甘油菌种 V. natriegens 接种3 mL LB-V2培养基，在30 °C、225 rpm振荡条件下过夜培养。
3. 通过在 10,600 x g 条件下离心，洗涤 1 mL 过夜培养物 g 在台式离心机中离心1分钟。吸取上清液，注意不要扰动形成的沉淀，然后将沉淀重悬于1 mL新鲜LB-V2培养基中。
4. 在已灭菌的4 L挡板锥形瓶（带无菌盖）中加入1 L新鲜LB-V2培养基。接种1 mL洗涤后的过夜培养物（接种比例为1:1,000）。在30 °C、225 rpm振荡条件下培养。
   注意： V. natriegens 培养物可在保持1:1,000稀释比例的前提下进行放大或缩小。例如，将250 μL洗涤后的过夜培养物加入装有250 mL新鲜LB-V2培养基的2 L带挡板锥形....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2 mL 离心管	Eppendorf	22363352
HEPES（4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸）	Sigma	H3375
LB（Luria-Bertani）培养基（Miller 型）	Sigma	L3522
氯化镁（MgCl₂）	Sigma	M8266
氯化钾（KCl）	Sigma	P9333
氯化钠（NaCl）	Sigma	S7653
Tris 溶液（pH 8.0）- 1 M	Invitrogen	AM9856
Vibrio natriegens（野生型）冻干菌种	ATCC	14048