Vibrio natriegens 粗提细胞裂解液的制备

摘要

来源： Wiegand, D. J., 等人无细胞蛋白表达利用快速生长的细菌 Vibrio natriegens 视觉实验杂志. (2019).

本视频演示了从生长迅速且以高蛋白合成速率著称的细菌Vibrio natriegens中制备细胞提取物的过程。将细菌沉淀洗涤后重悬于裂解缓冲液中，并在冰上进行超声处理，以防止细胞降解。裂解液经离心以去除不溶性细胞碎片，收集上清细胞提取物，快速冷冻后储存以备后续使用。

方案

1. 制备V. natriegens 粗细胞提取物——细菌培养

1. 准备 V. natriegens 细菌培养基，按LB-V2（Lysogeny Broth版本2）配方 表1. 使用高压灭菌器对培养基进行灭菌。待培养基冷却至室温（RT）。将多余的培养基在室温（RT）下储存。
   注意： 穿戴适当的个人防护装备（PPE），操作高压灭菌器时应查阅实验室特定的操作规程。
2. 使用野生型甘油菌种 V. natriegens 接种3 mL LB-V2培养基，30℃过夜培养 °225 rpm 摇床培养。
3. 通过在 10,600 x g 条件下离心，洗涤 1 mL 过夜培养物 g 在台式离心机中离心1分钟。吸取上清液，注意不要扰动形成的沉淀，然后将沉淀重悬于1 mL新鲜LB-V2培养基中。
4. 在已灭菌的4 L带挡板锥形瓶中加入1 L新鲜LB-V2培养基，并用无菌盖密封。取1 mL经洗涤的过夜培养物（按1:1,000比例稀释）接种。于30 °C培养 °225 rpm 振荡条件下，于 C 中培养。
   注意： V. natriegens 培养物可在保持1:1,000稀释比例的同时进行放大或缩小。例如，加入250 μ将洗涤后....

结果

图1：超声平台上的烧杯和试管架的特写视图。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
15 mL 离心管	Corning	352196
2 mL 离心管	Eppendorf	22363352
50 mL 离心管	Corning	352070
杜瓦瓶 - 4L	ThermoScientific	10-194-100C
L-谷氨酸半镁盐四水合物	Sigma	49605
L-谷氨酸钾盐一水合物	Sigma	G1149
LB 培养基（Miller 型）	Sigma	L3522
氯化镁（MgCl₂）	Sigma	M8266
氯化钾（KCl）	Sigma	P9333
氢氧化钾颗粒	Sigma/Roche	1050121000
Q125 超声波破碎仪及 CL-18 探头	Qsonica	4422
氯化钠（NaCl）	Sigma	S7653
Vibrio natriegens（野生型）冻干菌种	ATCC	14048