Phormidium lacuna 丝状体中的滑行运动

摘要

来源：Weber, N., 等，丝状蓝细菌Phormidium lacuna的自然转化、蛋白表达与低温保存。J. Vis. Exp. (2022)

本视频演示了通过将丝状培养物匀浆以制备均匀悬浮液、在显微镜载玻片上准备培养皿检测装置以及观察丝状物运动，来评估Phormidium lacuna滑行运动能力的实验步骤。

方案

1. 液体培养基中运动性的检测
   1. 为直接观察运动性，将含有P. lacuna的8 mL培养基转移至6 cm的培养皿中。静置数分钟，待样品升至室温后，用玻璃纸覆盖培养皿。
   2. 将显微镜载玻片置于配备相机的标准显微镜的X-Y载物台上。打开显微镜光源。理想情况下，应始终使用相同的电学和光学照明设置。将4倍或10倍物镜移入光路中。
   3. 将培养皿置于载玻片上方。通过载物台的X、Y和Z方向移动，调整单根丝状体或丝状体束的位置。
      注意：由于三维结构的存在，仅部分目标区域可同时处于焦平面内。玻璃纸的使用可实现无限制的调焦操作。
   4. 观察单根丝状体或丝状体束的运动。确保物镜不接触液体。使用标准显微镜相机记录丝状体的运动过程。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
玻璃器皿，不同类型
显微镜 DM750	Zeiss
目镜相机 MikrOkular Full HD	Bresser		用于延时记录，连接至树莓派微型计算机
聚苯乙烯培养皿，60 mm × 15 mm	Merck	P5481-500EA
软件，网址
ImageJ		图像处理软件（用于像素强度、圆直径分析）
培养基
人工海水	0.41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl, 2.4 mM NaHCO₃, 0.84 mM KBr, 0.49 mM H₃BO₃, 90 µM SrCl₂, 72 µM NaF
f/2 液体培养基	人工海水，0.1 % (v/v) 微量元素溶液，0.05 % (v/v) 维生素溶液，0.88 mM NaNO₃, 36 µM NaH₂PO₄
微量元素溶液	0.36 mM NaH₂PO₄, 12 µM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄, 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0.91 µM MnCl₂
维生素溶液	0.3 µM 硫胺素-HCl, 2.1 nM 生物素, 0.37 nM 氰钴胺