组织学与血液学分析以评估效应 枯草芽孢杆菌 在热应激大鼠中

摘要

来源：Sorokulova, I., 等。利用Bacillus subtilis菌株预防热应激对大鼠的不良影响。J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了用于评估保护作用的组织学和血液显微镜分析方法 枯草芽孢杆菌 在暴露于热应激的大鼠中。

方案

1. 组织学分析

1. 通过手术操作从每只实验大鼠取出小肠样本。将样本固定于Bouin固定液中，经石蜡包埋后制备6 µm切片，并按照标准操作流程进行苏木精-伊红染色。
2. 采用高分辨率显微镜系统测量每份样本的小肠绒毛高度及总黏膜厚度（放大倍数100倍）。每只大鼠分析4份样本，每份样本至少进行二十次测量。结果以微米表示。

2. 血液的高分辨率光学显微镜观察

1. 使用减震隔离平台作为显微镜系统、摄像机和计算机的基座，以记录实时图像。使用理查森校准片（Richardson slide）校准测试图像。
2. 取每只大鼠新鲜抽取的血液7 µl，置于玻璃载玻片上，加盖盖玻片，拍摄并记录每个样本中10个72 × 53.3 µm²的图像帧（放大倍数1,700倍）。
3. 使用可实时提供高分辨率直接可视光学图像的软件测量囊泡浓度。每种实验条件下至少分析20个图像帧。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
磷酸盐缓冲液（PBS）	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Bouin 固定液	Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA	15990
Richardson 测试玻片	Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA	80303
Sony DXC-33 视频摄像机	Sony
光学显微镜系统	CitoViva Technology Inc., Auburn,AL
Image-Pro Plus 软件	Media Cybernetics, MD, USA